白花丹參提取物對血管內皮細胞損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:觀察白花丹參對人臍靜脈血管內皮細胞損傷是否具有保護作用；研究其發(fā)揮作用的機制與血管內皮細胞凋亡的關系；探討白花丹參對凋亡相關蛋白Bcl-2表達的影響。為評價白花丹參的藥用價值提供依據。 方法:應用酶消化灌注法培養(yǎng)人臍靜脈血管內皮細胞，采用形態(tài)學觀察和VⅢ因子抗體免疫熒光檢測法進行鑒定；取對數生長期的細胞按如下分組進行處理:(1) 正常對照組；(2) H2O2損傷模型組：H2O2(H2O2的終濃度為2mmol/L)；(3)

2、白花丹參高劑量組：白花丹參(0.10 g/ml)+H2O2；(4) 白花丹參中劑量組：白花丹參(0.03 g/ml)+H2O2；(5) 白花丹參低劑量組：白花丹參(0.01g/ml)+H2O2；干預4小時后，應用形態(tài)學觀察法和MTT法檢測各組血管內皮細胞增殖存活情況：應用流式細胞技術和AO、EB聯合染色觀察各組細胞凋亡的情況；應用免疫細胞熒光技術檢測各組Bcl-2蛋白表達的情況。 結果: 1.細胞培養(yǎng)與鑒定結果

3、(1) 形態(tài)學觀察：HUVEC接種于培養(yǎng)瓶5-7天后細胞已基本融合，呈特征性的“鋪路石”樣鑲嵌排列。 (2)VⅢ因子抗體免疫細胞熒光技術鑒定HUVEC：共聚焦顯微鏡下可見95％以上的細胞核周圍呈黃綠色發(fā)亮熒光。以上結果證明培養(yǎng)的細胞為血管內皮細胞。 2.白花丹參對血管內皮細胞增殖存活情況的影響 (1) 形態(tài)學觀察：H2O2損傷模型組細胞損傷明顯，經白花丹參高、中、低各劑量組的干預，受損情況均有顯著改善，且白花丹參

4、的劑量越高損傷程度越輕。 (2) MTT法：正常對照組細胞活性最高，吸光度值為0.744±0.043，H2O2損傷模型組最低，吸光度值為0.082±0.009，二者比較有顯著的統(tǒng)計學差異。白花丹參高劑量組、白花丹參中劑量組和白花丹參低劑量組的吸光度值依次為0.621±0.065、0.529±0.065和0.305±0.023，與H2O2損傷模型組相比，白花丹參高、中、低劑量組均有顯著性差異。 3.白花丹參對血管內皮細胞凋

5、亡的影響 (1) 流式細胞技術：H2O2損傷模型組內皮細胞凋亡率(％)為40.63±3.48，明顯高于正常對照組的7.93±1.45；白花丹參高劑量組、白花丹參中劑量組和白花丹參低劑量組的凋亡率依次為15.47±5.20、21.34±4.90和31.08±1.93，與模型組相比均有統(tǒng)計學意義。 (2) AO-EB染色結果與流式細胞技術檢測結果基本一致。 4.白花丹參對血管內皮細胞Bcl-2蛋白表達的影響正常對照組

6、Bcl-2蛋白表達的平均熒光強度為19.33±1.17；與之相比，H2O2損傷模型組Bcl-2蛋白表達的平均熒光強度為14.61±0.53，明顯減低；與H2O2損傷模型組相比，白花丹參高、中劑量組使血管內皮細胞Bcl-2蛋白表達明顯增加，平均熒光強度分別為20.78±1.88和17.50±0.32；而白花丹參低劑量組的平均熒光強度為15.40±0.38，與H2O2損傷模型組相比沒有統(tǒng)計學差異。 結論: 1.白花丹參提取物