黃芩苷對(duì)熱應(yīng)激條件下小鼠胚胎HSP70及凋亡相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、在受熱及其他不利理化因素的刺激下，多數(shù)生物細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生熱休克蛋白（HSPs），其中 HSP70在生物細(xì)胞中含量最高，可誘導(dǎo)性最強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞具有顯著抗熱作用。細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞自主的程序性死亡，其中線粒體在細(xì)胞凋亡中起著無(wú)法替代的作用。Bcl-2家族對(duì)線粒體凋亡通路具有顯著的調(diào)控作用，其中Bcl-2具有抗凋亡作用，而B(niǎo)ax能夠拮抗Bcl-2，起到促凋亡的作用。Caspase被認(rèn)為是一切凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同通路，在 Caspase家族中，

2、Caspase-3是最重要的凋亡執(zhí)行者。黃芩苷是從黃芩的干燥根中提取的主要成分之一，其解熱作用顯著。目前有關(guān)黃芩苷在胚胎上的的抗熱作用機(jī)制研究甚少，而黃芩苷誘導(dǎo) HSP70表達(dá)拮抗熱應(yīng)激條件下的胚胎凋亡可能是黃芩苷抗熱應(yīng)激的機(jī)制之一。本研究將檢測(cè)不同濃度的黃芩苷對(duì)體外胚胎發(fā)育的影響和對(duì)熱應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠胚胎HSP70、Bcl-2、Bax和Caspase-3表達(dá)的影響，以探索黃芩苷保護(hù)熱損傷胚胎的部分機(jī)理。試驗(yàn)方法及結(jié)果如下：
　　在

3、CZB胚胎培養(yǎng)液中添加終濃度分別為2μg/mL、4μg/mL和8μg/mL的黃芩苷，將體外獲取的原核期胚胎放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，記錄胚胎各階段發(fā)育率及囊胚期細(xì)胞總數(shù)。隨后對(duì)發(fā)育至囊胚的胚胎進(jìn)行41℃1 h的熱應(yīng)激處理，試驗(yàn)分為37℃和41℃對(duì)照組及41℃黃芩苷組（2μg/mL、4μg/mL和8μg/mL），恢復(fù)3 h，提取總RNA用巢式-PCR檢測(cè)HSP70、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量；用免疫熒光法檢測(cè)HSP

4、70、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的分布及相對(duì)表達(dá)量。
　　試驗(yàn)結(jié)果顯示：在CZB胚胎培養(yǎng)液中添加4μg/mL黃芩苷時(shí)，其各階段胚胎發(fā)育率及囊胚細(xì)胞總數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。41℃對(duì)照組和黃芩苷各組均能顯著誘導(dǎo)小鼠胚胎的HSP70蛋白的表達(dá)（P<0.05），HSP70 mRNA表達(dá)量除4μg/mL黃芩苷組與41℃對(duì)照組差異顯著外（P<0.05），其余各組與41℃對(duì)照組相比均不顯著（P>0.05）。與41℃

5、對(duì)照組相比，黃芩苷組小鼠胚胎中 Bcl-2 mRNA和蛋白的表達(dá)量均顯著升高（P<0.05），Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)量均顯著降低（P<0.05）。
　　以上結(jié)果說(shuō)明：在CZB胚胎培養(yǎng)液中添加黃芩苷（2~8μg/mL）能促進(jìn)體外小鼠胚胎發(fā)育及細(xì)胞增殖，最佳濃度為4μg/mL。41℃熱應(yīng)激可通過(guò)線粒體凋亡通路誘導(dǎo)小鼠胚胎發(fā)生凋亡，并且可提高HSP70蛋白的表達(dá)。本試驗(yàn)條件下，黃芩苷（2~8μg/mL）能夠上調(diào)熱