環(huán)維黃楊星D對阿霉素心臟毒性的保護作用及其機制研究.pdf

1、阿霉素(Doxorubicin，DOX)是一種臨床常用的廣譜、高效抗腫瘤藥物，廣泛用于白血病、肺癌和乳腺癌等實體腫瘤的治療，因具有明顯的心臟毒副作用而限制其臨床應用。目前尚無較理想的預防和治療DOX心臟毒性的藥物。環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxine D，Cvb-D)系提取自傳統(tǒng)中藥小葉黃楊的一種生物堿單體，對于心律失常、冠心病、心力衰竭等心血管疾病具有良好的防治效果。本研究旨在觀察Cvb-D對DOX心臟毒性的保護作用，并探討其

2、可能的作用機制，為DOX心臟毒性的防治提供新思路和方法。
　　本研究對C57小鼠采用單次腹腔注射給藥建立DOX心臟損傷模型，隨機將動物分為對照組、Cvb-D組、DOX組以及Cvb-D+DOX組。灌胃給予Cvb-D(1 mg/kg)預處理4天，第5天單次腹腔注射DOX(15mg/kg)。DOX給藥后每日測量體重。DOX給藥4天后采用無創(chuàng)超聲心動圖技術評價心功能;心肌組織切片進行常規(guī)HE染色和心肌纖維化Masson's染色，光鏡下觀察

3、心肌組織形態(tài)學改變;采集小鼠血液樣本，測定血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)水平，評價Cvb-D對DOX致機體毒性損傷的特征;采用黃嘌呤氧化法測定心肌組織中超氧陰離子（O2·-）的水平，應用Griss法檢測心肌組織一氧化氮(NO)的含量，評價Cvb-D對DOX引起的小鼠心肌氧化狀態(tài)的影響;采用TBARS和DNPH比色法檢測心肌組織脂質過氧化和蛋白羰基化水平，評價Cvb-D對DOX引起的小鼠心肌氧化損傷的影響;應用黃嘌呤氧化酶法

4、測定錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性，并采用DNTB的循環(huán)反應原理檢測心肌組織中還原/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比值，評價Cvb-D對DOX引起的心肌抗氧化系統(tǒng)改變的影響;為了評價線粒體途徑在Cvb-D對DOX誘導小鼠心肌細胞凋亡中的影響，采用TUNEL法檢測心肌組織切片中的凋亡細胞，鏡下計數凋亡指數;測定心肌組織中Caspase-3的活性，采用蛋白印跡方法(Western blot)測定組織中Caspase-3、Bcl

5、-2和Bax蛋白的表達以及細胞漿/線粒體中細胞色素C(Cytochrome C)的分布;檢測心肌組織中PGC-1α、Nrf-1蛋白的表達，并利用qPCR測定線粒體基因(mtDNA)拷貝數，以此評價Cvb-D對DOX誘導小鼠心肌組織線粒體損傷的影響。
　　研究結果表明，與對照組相比，Cvb-D可明顯改善DOX誘導的心功能改變，降低DOX引起的左心室舒張末期內徑(LVEDD)和左心室收縮末期內徑(LVEDS)的增加、提高左室短軸縮短分

6、數(FS)和左室射血分數(EF)等參數;抑制DOX引起的體重和心臟濕重比率下降;減輕心肌腫脹、空泡化等組織形態(tài)學改變以及心肌纖維化改變;降低DOX引起的血清中LDH及CK升高;Cvb-D能夠減輕DOX致心肌組織氧化損傷程度，包括降低心肌組織中MDA的含量和蛋白羰基化損傷程度，增加GSH/GSSG水平，并降低O2·-和NO水平;Cvb-D可明顯抑制DOX誘導的心肌細胞凋亡增加，提高心肌組織Caspase-3表達及活性以及Bcl-2/Bax

7、蛋白表達的比值;Cvb-D能夠提高線粒體中細胞色素C的表達;提高線粒體基因拷貝數;并且能夠促進與線粒體功能密切相關的PCG-1α、Nrf-1基因表達。
　　以上實驗結果表明，Cvb-D對DOX心臟毒性具有明顯的保護作用，其機制可能與Cvb-D抗氧化作用有關，自由基的清除可能在此過程中發(fā)揮重要的作用，同時Cvb-D能夠緩解DOX引起的心肌細胞線粒體損傷，抑制由DOX誘導的Caspase-3活化而產生的心肌細胞凋亡，推測Cvb-D對D