杏種質(zhì)資源親緣關(guān)系及分類地位的ISSR和SSR分子標(biāo)記研究.pdf

1、杏為核果類果樹，原產(chǎn)于中國，種質(zhì)資源十分豐富。對包括杏在內(nèi)的果樹品種品系鑒定多采用形態(tài)學(xué)、孢粉學(xué)和生理生化等方法，近年來分子標(biāo)記技術(shù)的誕生，相繼有采用RAPD方法對杏種質(zhì)資源研究的一些報(bào)道，而其他分子標(biāo)記方法如ISSR、SSR對杏種質(zhì)資源進(jìn)行分析的報(bào)道還寥寥無幾。本研究為《杏種質(zhì)資源親緣關(guān)系及分類地位的ISSR和SSR分子標(biāo)記研究》，旨在從DNA水平上，對30份杏品種資源及主要種基因組DNA進(jìn)行ISSR、SSR分析，研究杏種、品種之間的

2、親緣關(guān)系和分類地位，并建立主要杏種、品種的DNA指紋圖譜，進(jìn)行品種品系的鑒定，為品種審定、保護(hù)奠定基礎(chǔ)；同時(shí)對仁用杏品系的起源問題進(jìn)行探索。試驗(yàn)得出以下結(jié)論： (1)杏屬植物ISSR優(yōu)化反應(yīng)體系：總體積20μl時(shí)，DNA模板量200ng；引物濃度0.2μM，10×buffer(20mM MgSO<,4>，100mMKCl，80mM(NH<,4>)SO<,4>，100mMTris-HCl，0.5％NP-40，pH9.0)2μl，d

3、NTP 200μM，Taq聚合酶2U，最佳退火溫度52℃。 (2) SSR標(biāo)記可在不同種甚至不同屬之間有通用性。本試驗(yàn)從桃和櫻桃上開發(fā)的108對SSR引物中篩選出22對引物：BPPCT009、BPPCT020、BPPCT022、BPPCT033、BPPCT040、CPPCT6、CPPCT7、CPPCT8、CPPCT10、CPPCT14、CPPCT15、CPPCT16、CPPCT28、CPPCT30、CPPCT31、UDP96-0

4、10、UDP96-015、UDP96-019、UDP94-402、UDP98-406、UDP98-408、PS08E08。這些引物可直接應(yīng)用于杏種、品種間的SSR分析。 (3)30份杏屬植物材料的ISSR、SSR標(biāo)記研究，采用了聚類分析和主坐標(biāo)分析兩種方法。 ISSR標(biāo)記結(jié)果分析： 聚類結(jié)果將所用杏屬植物的試材大致劃分為9大組：組Ⅰ為普通杏的所有品種和一個(gè)西伯利亞的品種紅花山杏；組Ⅱ?yàn)椴匦訂为?dú)歸為一組；組Ⅲ為所有

5、的仁用杏品種；組Ⅳ為西伯利亞杏的品種包括西伯利亞杏、大山杏、遼梅；組Ⅴ為遼杏單獨(dú)劃為一組；組Ⅵ為李梅杏的一個(gè)品種紅梅杏；組Ⅶ為紫杏；組Ⅷ為李梅杏的品種包括泰安杏梅、李蜜杏、昌黎杏梅；組Ⅸ為梅杏雜交種送春單獨(dú)為一組。 主坐標(biāo)分析結(jié)果將30份供試材料明顯的劃分為三組，其中仁用杏系品種在坐標(biāo)圖中分布區(qū)域比較密集，劃為一組；李梅杏的幾個(gè)品種、紫杏、送春分布到一個(gè)區(qū)域中，將其劃為一組；普通杏、西伯利亞杏、遼杏、藏杏聚集在一個(gè)區(qū)域，將其劃為

6、一組。 SSR 標(biāo)記結(jié)果分析： 聚類結(jié)果將所用杏屬植物的試材大致劃分為9大組：組Ⅰ為普通杏的4個(gè)品種駱駝黃、華縣接杏、陜梅杏、串枝紅及一個(gè)仁用杏品種80D05；組Ⅱ?yàn)槲鞑麃喰拥乃衅贩N和仁用杏除80D05在外的所有品種；組Ⅲ為遼杏單獨(dú)劃為一類；組Ⅳ為一個(gè)普通杏品種克孜克西米西和藏杏聚在了一起；組Ⅴ為李梅杏的一個(gè)品種紅梅杏；組Ⅵ為梅杏雜交種送春；組Ⅶ為泰安杏梅、李蜜杏，是李梅杏的兩個(gè)品種；組Ⅷ為昌黎杏梅亦屬于李梅杏；組Ⅸ

7、為紫杏，是單獨(dú)的一個(gè)種。主坐標(biāo)分析結(jié)果顯示，普通杏、西伯利亞杏、遼杏、藏杏的所有代表品種聚集在第一象限，與 ISSR的主坐標(biāo)分析不同的是，一個(gè)李梅杏品種紅梅杏(14)亦聚在了這里；13個(gè)仁用杏品種的分布情況是由第一象限逐漸過渡到第二象限，其中3個(gè)仁用杏品種分布在上述品種的周圍，而6個(gè)仁用杏品種則完全分布在第二象限，其余仁用杏品種介于二者之間；李梅杏品種泰安杏梅(15)、李蜜杏(16)昌黎杏梅(17)及紫杏、送春聚集在第三象限。

8、(4) SSR標(biāo)記聚類分析顯示，供試材料油仁對豐仁的遺傳距離為0，在DNA分子水平上看，二者為同物異名。 (5)C210-5是從龍王帽中經(jīng)過營養(yǎng)系選擇的方法得到的品種，試驗(yàn)通過SSR-PCR的方法，證明了C210-5可以作為一個(gè)單獨(dú)的品種進(jìn)行品種命名。 (6) 仁用杏的起源聚類結(jié)果認(rèn)為：ISSR 方法與普通杏的親緣關(guān)系較近；SSR方法與西伯利亞杏的親緣關(guān)系較近。主坐標(biāo)分析結(jié)果大多數(shù)都偏離普通杏種群和西伯利亞種群，因此，仁