副溶血弧菌與溶藻弧菌毒力基因分布與抗生素耐藥性分析.pdf

1、兩種主要食源性弧菌——副溶血弧菌和溶藻弧菌都是海洋生態(tài)環(huán)境中廣泛分布的正常菌群，同時(shí)也是重要的病原弧菌，不僅能使水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物患病，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還能導(dǎo)致人類食物中毒和胃腸道感染，危害人體健康。鑒于副溶血弧菌和溶藻弧菌具有高度同源性，而現(xiàn)有研究集中在前者，對(duì)于溶藻弧菌的致病機(jī)理缺乏了解。本論文在毒力相關(guān)基因和抗生素抗性兩方面的特性比較副溶血弧菌和溶藻弧菌，通過分析與比較兩種弧菌毒力基因分布情況及多藥耐受現(xiàn)象之間的異同，為了解這兩種弧

2、菌的致病機(jī)制、耐藥機(jī)制、流行病學(xué)研究和食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供指導(dǎo)，主要結(jié)果如下：
　　1.針對(duì)副溶血弧菌和溶藻弧菌的溶血素基因(trh、tdh、tlh)、毒力調(diào)控基因(toxR、toxS)和毒力貢獻(xiàn)基因(Collagenase、UreR、FlaA、ompW、AspA、fur)構(gòu)建了兩套多重 PCR體系并運(yùn)用于從環(huán)境和水產(chǎn)品（青口、白貝、和貴妃蚌等）分離的248株副溶血弧菌和128株溶藻弧菌的毒力基因分布調(diào)查，發(fā)現(xiàn)這11種毒力相關(guān)基因

3、在兩種弧菌中均有不同程度的分布：tlh、Collagenase、FlaA、ompW和fur基因在兩種弧菌中分布較廣，toxR和toxS基因次之；而且兩種弧菌的毒力基因分布情況都有各自的特點(diǎn)：副溶血弧菌的分離株不攜帶tdh和trh基因，AspA、toxR和toxS基因的攜帶率均超過90％；溶藻弧菌則相反，tdh和trh基因的攜帶率高達(dá)38.28%，AspA、toxR和toxS基因的攜帶率遠(yuǎn)低于副溶血弧菌。本論文所構(gòu)建的多重PCR體系以水煮

4、法提取的細(xì)菌DNA為模板同時(shí)檢測兩種弧菌的多個(gè)毒力相關(guān)基因，具有低成本、高靈敏度和高通量的特點(diǎn)，可用于基層大規(guī)模大范圍的毒力相關(guān)基因發(fā)布調(diào)查。
　　2.結(jié)合表型分型技術(shù)和分子分型技術(shù)，通過PCR反應(yīng)篩選與致病性高度相關(guān)的O3、O4型副溶血弧菌后輔以血清凝集實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證，從收集到的248株副溶血弧菌中篩選出8株O3型副溶血弧菌和9株O4型副溶血弧菌，通過限制性內(nèi)切酶SfiⅠ酶切后進(jìn)行脈沖場凝膠電泳（PFGE）分型，為環(huán)境副溶血弧菌致

5、病株的深入研究提供參考。
　　3.本論文采用 Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法研究上述副溶血弧菌和溶藻弧菌分離株對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中常用的18種抗生素（氨芐西林、阿莫西林、羧芐西林、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢呋新鈉、頭孢唑啉、慶大霉素、鏈霉素、阿米卡星、萬古霉素、多粘菌素B、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、紅霉素、環(huán)丙沙星、利福平和克林霉素）的耐藥狀況，發(fā)現(xiàn)兩種弧菌都對(duì)多種抗生素具有不同程度的抗性，多藥耐受情況十分嚴(yán)重，以溶藻弧菌為甚?；诃h(huán)境中溶藻