早期監(jiān)測(cè)人巨細(xì)胞病毒激活感染方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染在中國(guó)人群中表現(xiàn)的特點(diǎn)是潛伏-再激活.HCMV抗原血癥檢測(cè)中一個(gè)主要的靶抗原是HCMV低基質(zhì)磷酸化蛋白（pp65）,即HCMVpp65抗原.用針對(duì)HCMVpp65的單克隆抗體,通過(guò)免疫熒光或酶染技術(shù)檢測(cè)患者外周血多形核細(xì)胞（PMNLs)中HCMVpp65抗原的存在,根據(jù)檢出的陽(yáng)染細(xì)胞數(shù)判斷HCMV激活程度.為此,該研究旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)HCMV標(biāo)準(zhǔn)毒株AD-169感染人胚肺成纖維細(xì)胞（HELF）制備的陽(yáng)性細(xì)胞片

2、作為對(duì)照,本建立并優(yōu)化HCMVpp65抗原血癥的檢測(cè)方法（免疫組化）.包括單克隆抗體、固定方法、免疫染色方法的選擇,各種試劑的有效工作濃度以及操作過(guò)程的穩(wěn)定性等.我們選擇的抗HCMVpp65的單抗為C<,10～11>和C<,2～6>兩種混合單抗,分別進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)分析無(wú)顯著差異（P>0.05）,即任何一種都可選用.在實(shí)驗(yàn)室建立穩(wěn)定可行的HCMVpp65抗原血癥檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上,用此方法與熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）兩種方