顱骨缺損生物性修復(fù)的實驗研究——骨髄來源的成骨細(xì)胞復(fù)合異體滅活多孔骨瓣修補顱骨缺損.pdf

1、目的:建立新西蘭大白兔標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損的動物模型,利用組織工程方法,在無外源性生長因子的作用下,將體外培養(yǎng)擴增的自體BM SCs定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處以修復(fù)兔子標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損,同時闡明本實驗的相關(guān)機制及可行性,為臨床上尋找更好的顏骨缺損生物學(xué)修補方法提供基礎(chǔ)研究。
　　材料及方法:實驗動物為純種新西蘭大白兔50只,雌雄不限,4月齡左右。分兩大組:(I)實驗組(25只),將體外培養(yǎng)擴增的自體BM

2、SCs定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處,修復(fù)兔子顏骨標(biāo)準(zhǔn)缺損;(2)常規(guī)對照組(25只),僅異體滅活多孔顱骨瓣回植顱骨缺損處,修復(fù)兔子顱骨標(biāo)準(zhǔn)缺損。兩組于第10、15天對受區(qū)進(jìn)行成骨細(xì)胞內(nèi)源性BMP-2的免疫組化檢查,另兩組設(shè)2周、4周、8周、12周、16周5個時限,于各個限點處死動物取材,對受區(qū)分別進(jìn)行大體形態(tài)、組織學(xué)、掃描電鏡觀察和最終所形成的骨瓣進(jìn)行骨密度的檢查,每個限點5只動物。
　　結(jié)果:

3、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)、體外擴增經(jīng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后,可轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞,經(jīng)堿性磷酸酶檢測證實其為成骨細(xì)胞。實驗組和常規(guī)對照組共50例,除其中I例術(shù)后移植區(qū)發(fā)生感染和I例不明原因死亡外,其它48例顱骨缺損區(qū)均得到較滿意的修補效果。實驗結(jié)果觀察:1.大體形態(tài):實驗組與常規(guī)對照組無明顯差別,16周時兩組受區(qū)均已基本為新生骨代替,與缺損邊緣形成骨性愈合,界面牢固。2.組織學(xué)及電鏡檢查:實驗組受區(qū)內(nèi)可見有大量成骨細(xì)胞充填于死骨孔隙內(nèi),細(xì)胞增殖并見胞

4、外基質(zhì)分泌,見骨陷窩形成及血管長入植骨區(qū)。大量骨化中心形成,成骨細(xì)胞被固定在骨基質(zhì)中變?yōu)楣羌?xì)胞,形成小梁狀不成熟的編織骨組織,隨著骨基質(zhì)中礦物質(zhì)和有機物的增加,骨基質(zhì)日趨成熟,鈣化明顯,從而使層板骨取代編織骨完成顱骨缺損的修補。常規(guī)對照組受區(qū)內(nèi)的成骨細(xì)胞數(shù)量、成骨活性及血管化均不如實驗組,且時間上成骨活動比實驗組慢4一6周。3.內(nèi)源性BMP-2免疫組織化學(xué)檢查:第10天和第15天的兩次檢測,實驗組細(xì)胞內(nèi)源性BMP-2免疫組織化學(xué)檢查見胞

5、質(zhì)內(nèi)有深染的棕黃色顆粒,陽性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強度均比常規(guī)對照組強。4.骨密度的測定:實驗組骨礦含量和骨密度(B M C、BMD)結(jié)果稍低于正常對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,而常規(guī)對照組骨礦含量和骨密度明顯低于正常對照組及實驗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、骨髓可以成為骨組織工程中較常用的種子細(xì)胞來源。2、異體多孔顱骨瓣經(jīng)高溫滅活后可以成為骨組織工程中較常用的支架來源。3、自體成骨細(xì)胞復(fù)合異體滅活多孔顱骨瓣修補盧頁骨缺損主要是以膜