蝦蟹養(yǎng)殖池塘益生菌的分離篩選及降解特性初步研究.pdf

1、本實驗前期采集了位于江蘇省連云港市贛榆區(qū)混養(yǎng)三疣梭子蟹（P ortunus trituberculatus）與日本囊對蝦（Marsupenaeus aponicus）池塘的表層沉積物，利用不同培養(yǎng)基，分別對沉積物中的復(fù)合菌進(jìn)行了五、六個周期的富集和馴化培養(yǎng)，每周期結(jié)束之后，都分別檢測復(fù)合菌對COD、氨態(tài)氮的降解能力。當(dāng)幾個周期全部結(jié)束之后，又分別將復(fù)合菌中的單株菌通過平板進(jìn)行分離、16S rRNA進(jìn)行鑒定，通過血平板及單株菌對COD、氨

2、態(tài)氮的降解能力進(jìn)行篩選，之后將經(jīng)過鑒定和篩選的單株菌按一定比例配合之后，再次檢測組合菌對COD、氨態(tài)氮的降解能力。本實驗后期選擇了一株短小芽孢桿菌，比較了在不同環(huán)境因子下其對無機氮的降解能力。目前，為使養(yǎng)殖環(huán)境保持清潔、養(yǎng)殖動物健康成長，利用養(yǎng)殖環(huán)境中天然存在的或從養(yǎng)殖生物體內(nèi)分離的菌來對環(huán)境中的污染物進(jìn)行降解受到廣泛關(guān)注。不過從蝦蟹養(yǎng)殖池塘中篩選能夠高效降解污染物的菌則少見報道。本研究目的是獲得能夠降解蝦蟹養(yǎng)殖池塘中有機物污染和無機氮

3、污染的兩類菌，旨在為菌規(guī)模化培養(yǎng)及在海水養(yǎng)殖污水處理的潛在應(yīng)用提供依據(jù)、為蝦蟹養(yǎng)殖池塘生態(tài)環(huán)境的改善及蝦蟹養(yǎng)殖池塘微生態(tài)制劑的研究提供菌株和理論支持。本論文實驗設(shè)計及主要研究成果如下:
　　1.蝦蟹養(yǎng)殖池塘有機物降解菌富集馴化與分離篩選
　　采集蝦蟹混養(yǎng)池塘沉積物，利用特定餌料培養(yǎng)基，并通過定期增加培養(yǎng)基中餌料添加量的方式，對沉積物中的復(fù)合菌進(jìn)行了六個周期（7天/周期）的富集馴化培養(yǎng)。在COD含量約為1000mg/L、菌接種

4、量為10％的餌料降解溶液中，后期復(fù)合菌在5天內(nèi)對COD的最大去除率分別達(dá)到了64％、70％和88％。在六個周期富集馴化結(jié)束后，從復(fù)合菌中分離出16株菌，經(jīng)16S rRNA分析，其中8株屬于弧菌屬(vibrio sp.)，1株屬于芽孢桿菌目(Bacillalessp.)，2株屬于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)，2株屬于交替假單胞菌屬(Pseudoalteromonas sp.)，1株屬于氣單胞菌屬(Aeromonas sp.)，1

5、株屬于希瓦氏菌屬(Shewanella sp.)。經(jīng)血平板初步篩選出4株不具潛在致病性的菌，1株屬于芽孢桿菌目，1株為巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)，2株為交替假單胞菌，在菌接種量為1.0×107cfu/mL的降解溶液中，各株菌在5天內(nèi)對COD的最大去除率分別達(dá)到了40％、40％、56％和46％。將這4株菌按一定比例組合后，在5天內(nèi)對COD的最大去除率可達(dá)到72％。研究表明，經(jīng)富集馴化后的復(fù)合菌及從中分離篩選出的4

6、株不具潛在致病性的細(xì)菌及按一定比例重組后的菌在調(diào)控養(yǎng)殖環(huán)境有機物污染方面都具有潛在應(yīng)用價值。
　　2.蝦蟹養(yǎng)殖池塘氨氮降解菌富集馴化與分離篩選
　　利用特定培養(yǎng)基，對蝦蟹混養(yǎng)池塘沉積物中的氨氮降解復(fù)合菌進(jìn)行了五個周期（14天/周期）的富集馴化培養(yǎng)。每周期結(jié)束后，在菌接種量為10％，氨氮含量約為120mg/L的基礎(chǔ)降解溶液中，5天內(nèi)復(fù)合菌對氨態(tài)氮的最大去除率分別為29％，60％，69％，74％，72％。五個周期的富集馴化培養(yǎng)結(jié)

7、束后，從復(fù)合菌中分離出12株菌，經(jīng)16S rRNA序列分析，8株屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)，4株屬于鹽單胞菌屬(Halomonas)。根據(jù)菌株對紅細(xì)胞的溶血性，初步篩選出6株菌，其中2株為芽孢桿菌，4株為鹽單胞菌。在菌接種量為106cfu/mL的降解溶液中，5天內(nèi)各單株菌對氨態(tài)氮的最大去除率分別為59％、33％、42％、41％、40％和43％;菌接種量為1×107cfu/mL時，5天內(nèi)各單株菌對氨態(tài)氮的最大去除率分別為70％、7

8、1％、88％、79％、51％和55％。將這6株菌按特定比例重新組合后，組合菌C在5天內(nèi)對氨態(tài)氮的去除能力較高，去除率達(dá)到62％。
　　3.一株異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌株的脫氮特性研究
　　本研究測定了短小芽孢桿菌E6在不同培養(yǎng)時間、溫度、鹽度、pH、菌接種量、C∶N（質(zhì)量比）、碳源等條件下對氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硝酸態(tài)氮及總無機氮降解能力。將菌株E6接種到氨態(tài)氮濃度為107.72mg/L、亞硝酸態(tài)氮濃度為8.55mg/L、硝酸態(tài)