自噬在急性胰腺炎發(fā)病過(guò)程中的作用.pdf

1、背景：
　　急性胰腺炎是外科常見的急腹癥,其發(fā)病原因尚不清楚,總體死亡率約為5％,其中重癥壞死性胰腺炎死亡率高達(dá)35~50%。目前大多研究者認(rèn)為胰酶原在胰腺細(xì)胞內(nèi)非正常激活,是造成急性胰腺炎發(fā)生的原因。然而胰腺細(xì)胞內(nèi)的胰酶原又是如何激活的,目前也沒有明確闡明,有研究報(bào)道自噬參與到該過(guò)程中,可是,自噬在該過(guò)程中究竟是起到保護(hù)作用還是損害作用,尚存在很大爭(zhēng)議。
　　目的：
　　探索自噬在急性胰腺炎發(fā)病過(guò)程中的作用,闡述急性

2、胰腺炎的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　1.動(dòng)物體內(nèi)觀察胰腺炎時(shí)自嗜的改變:采用C57小鼠腹腔間斷注射雨蛙素誘導(dǎo)急性胰腺炎模型,檢測(cè)血清淀粉酶、干濕重和胰腺組織病理變化評(píng)價(jià)胰腺炎損傷度,通過(guò)Western-blot檢測(cè)自噬特異蛋白LC3及胰腺組織透射電鏡檢測(cè),對(duì)比正常及饑餓組小鼠,觀察自噬在胰腺炎中的變化。
　　2.建立胰腺炎細(xì)胞模型,觀察其自嗜的改變:雨蛙素刺激AR42J細(xì)胞誘導(dǎo)胰腺炎細(xì)胞模型,通過(guò)Western-blo

3、t及免疫熒光檢測(cè)自噬特異蛋白LC3,觀察雨蛙素作用于腺體細(xì)胞后自噬的改變。
　　3.雨蛙素誘導(dǎo)自噬對(duì)胰腺炎細(xì)胞模型的影響:不同濃度雨蛙素刺激胰腺細(xì)胞或者同一雨蛙素濃度刺激胰腺細(xì)胞不同時(shí)間后,觀察細(xì)胞毒性、細(xì)胞活性及凋亡等細(xì)胞狀態(tài)。
　　4.自噬對(duì)胰酶活化的影響:不同濃度雨蛙素刺激胰腺細(xì)胞或者同一雨蛙素濃度刺激胰腺細(xì)胞不同時(shí)間,并給予3甲基腺嘌呤、羥氯喹、E64D在三個(gè)不同環(huán)節(jié)抑制自噬后,采用BZiPAR(胰酶熒光底物),檢測(cè)

4、胰酶活化情況,了解胰酶活化與自嗜的關(guān)系。
　　5.觀察不同嚴(yán)重程度胰腺炎小鼠模型自嗜變化間斷腹腔注射CR,通過(guò)不同的注射次數(shù),誘導(dǎo)出不同嚴(yán)重程度的急性胰腺炎動(dòng)物模型,用Western-blot檢測(cè)自噬特異蛋白LC3,觀察自噬同胰腺炎嚴(yán)重程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.胰腺炎動(dòng)物模型自噬體數(shù)目增多,包繞酶原顆粒并降解。
　　2.雨蛙素誘導(dǎo)胰腺炎細(xì)胞模型,自噬體增加,自噬功能障礙。
　　3.雨蛙素刺激并不能直

5、接引起AR42J細(xì)胞壞死或凋亡,相反,雨蛙素反而會(huì)促進(jìn)AR42J細(xì)胞增殖,這種增殖作用是可以通過(guò)抑制自噬來(lái)抑制的。
　　4.在雨蛙素的刺激下,AR42J細(xì)胞的胰酶原部分活化,酶原活化并不能隨時(shí)間的延長(zhǎng)而累積,也不隨雨蛙素濃度增加而提高;不同環(huán)節(jié)抑制自噬,均可抑制胰酶活化。
　　5.自噬障礙程度同胰腺炎的嚴(yán)重程度呈明顯正相關(guān),當(dāng)胰腺炎表現(xiàn)越重,自噬障礙越明顯。
　　結(jié)論：
　　本研究證實(shí)了自噬障礙參與急性胰腺炎胰酶