Scinderin對(duì)胃癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、研究目的：
　　胃癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤。腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致進(jìn)展期胃癌預(yù)后差的根本原因。近年來(lái)發(fā)現(xiàn),上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，已成為研究腫瘤轉(zhuǎn)移的重要分子機(jī)制。目前雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)眾多與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，但由于腫瘤轉(zhuǎn)移是多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，對(duì)于其機(jī)制仍不清楚。因而，尋找新的影響胃癌轉(zhuǎn)移的分子,對(duì)于胃癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的診斷、治療和預(yù)防具有非

2、常重要的意義。Scinderin是一種依賴(lài) Ca2+的肌動(dòng)蛋白絲(F-actin)切割蛋白,在細(xì)胞分泌過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。但目前,針對(duì)scinderin在人類(lèi)疾病尤其是腫瘤中的生物學(xué)功能研究報(bào)道的并不多。本研究擬揭示沉默scinderin對(duì)高轉(zhuǎn)移型的人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的遷移能力、EMT進(jìn)程、增殖能力以及細(xì)胞周期的影響。
　　研究方法：
　　1.構(gòu)建scinderin-shRNA慢病毒載體并感染人胃癌細(xì)胞株SGC-

3、7901,于熒光顯微鏡下觀測(cè)感染效率,利用RT-qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)scinderin的沉默效果，從而建立scinderin低表達(dá)的穩(wěn)定胃癌細(xì)胞株SGC-7901。
　　2.運(yùn)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默scinderin對(duì)SGC-7901細(xì)胞遷移能力的影響。
　　3.運(yùn)用RT-qPCR方法和Western Blot方法檢測(cè)分析沉默scinderin對(duì)SGC-7901細(xì)胞的E-cadherin和

4、N-cadherin等EMT標(biāo)志分子表達(dá)的影響。
　　4.運(yùn)用實(shí)時(shí)細(xì)胞分析儀(RTCA)和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)分析沉默 scinderin對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1.scinderin-shRNA慢病毒載體成功感染胃癌細(xì)胞株 SGC-7901，并使細(xì)胞內(nèi)scinderin的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平受到不同程度的抑制(P<0.01)。由此證實(shí)，成功建立了scinderin沉默的穩(wěn)定

5、胃癌細(xì)胞株SGC-7901。
　　2. Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細(xì)胞的遷移能力明顯降低(P<0.05)。
　　3. RT-qPCR和 Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細(xì)胞內(nèi)E-cadherin表達(dá)水平顯著升高(P<0.001)，而N-cadherin的表達(dá)水平顯著降低(P<0.001)。此外還發(fā)現(xiàn)，scinderin沉默的SGC

6、-7901細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)。
　　4. RTCA增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細(xì)胞的增殖能力明顯降低(P<0.05)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。
　　結(jié)論：
　　1.沉默scinderin可削弱高轉(zhuǎn)移型胃癌細(xì)胞株SGC-7901的EMT進(jìn)程，有效阻抑癌細(xì)胞的遷移能力