Wnt經(jīng)典信號(hào)通路在慢性氟中毒大鼠骨骼損傷中作用機(jī)制的研究.pdf

1、方法：利用飲水加入不同濃度（5mg/L和50mg/L）氟化鈉（NaF）進(jìn)行大鼠染氟實(shí)驗(yàn)，同時(shí)設(shè)置正常組，實(shí)驗(yàn)期8個(gè)月。實(shí)驗(yàn)中觀察大鼠氟斑牙的發(fā)生情況，使用電極選擇法測(cè)定尿氟及骨氟含量。確定慢性氟中毒模型的復(fù)制成功。HE（Hematoxylin-eosin，蘇木素-伊紅）染色觀察股骨骨組織的形態(tài)學(xué)變化；ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,酶聯(lián)免疫吸附法）檢測(cè)大鼠血清中BALP含量（Bone A

2、lkaline Phosphatase，骨堿性磷酸酶）和TRACP-5b（tartrate-resistant acid phosphataseform5b,抗酒石酸酸性磷酸酶）含量；IHC（Immunohistochemistry,免疫組織化學(xué)）方法檢測(cè)股骨成骨細(xì)胞Wnt3a和β-catenin蛋白表達(dá)水平；ISH（in situ hybridization，原位雜交）方法檢測(cè)股骨成骨細(xì)胞Wnt3a和β-catenin mRNA表達(dá)水

3、平。
　　結(jié)果：1、染氟大鼠出現(xiàn)不同程度氟斑牙損害，以高氟組最為嚴(yán)重，對(duì)照組無氟斑牙發(fā)生，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；尿氟及骨氟含量隨染氟濃度的增加而逐漸增加；表明慢性氟中毒大鼠模型復(fù)制成功。
　　2、 HE結(jié)果顯示慢性氟中毒大鼠骨密度增加，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表現(xiàn)為骨皮質(zhì)增厚，骨小梁增寬、排列緊密。骨密度隨著氟濃度升高而增加。
　　3、ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示在氟中毒組BALP升

4、高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與低氟組比較，高氟組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與正常組比較，低氟組TRACP-5b含量增加顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高氟組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但與低氟組比較，TRACP-5b含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，氟中毒組 Wnt3a蛋白和β-catenin蛋白表達(dá)均升高，與正常組比較，差異

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高氟組 Wnt3a蛋白質(zhì)和β-catenin蛋白表達(dá)高于低氟組表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；統(tǒng)計(jì)Wnt3a蛋白和β-catenin蛋白表達(dá)相關(guān)性，Wnt3a蛋白隨著β-catenin蛋白兩者的表達(dá)正相關(guān)性（R=0.856，P<0.05）。
　　5、原位雜交法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，氟中毒組Wnt3a mRNA和β-catenin mRNA表達(dá)均升高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高氟