流蘇石斛再生體系與農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究.pdf

1、流蘇石斛(Dendrobium fimbriatum.Hook)是我國藥用植物中很重要的一個品種，具有很好的藥用價值，主要有滋陰清熱、生津止渴等功效，主要分布于廣西、貴州、云南等地，生長于溫暖濕潤和半陰半陽的氣候環(huán)境。由于野生資源被過度采挖利用，加上其本身對生存環(huán)境的較高要求且產(chǎn)生的種子自然的繁殖率低以及生長緩慢的問題，已瀕臨滅絕。因此，選育新品種、建立快繁體系以及利用基因工程進(jìn)行改良成為當(dāng)前流蘇石斛研究的重點。本文以流蘇石斛種子為材料

2、，建立流蘇石斛再生體系和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為今后流蘇石斛基因工程育種提供重要的參考依據(jù)。主要試驗的結(jié)論如下:
　　1.以流蘇石斛種子為起始外植體，研究了基本培養(yǎng)基、植物生長調(diào)節(jié)劑、附加物等因素對流蘇石斛原球莖的誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)及原球莖芽分化和壯苗生根的影響。結(jié)果表明:(1)種子誘導(dǎo)原球莖最佳培養(yǎng)基為:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+2，4-D1.0mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂4.0g/L，經(jīng)培養(yǎng)40d

3、原球莖誘導(dǎo)率可達(dá)90％以上;(2)最佳增殖培養(yǎng)基配方為:MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.8 mg/L+IBA0.4mg/L+蔗糖30 g/L+土豆汁15％+活性炭0.5 g/L+瓊脂4.0 g/L，增殖系數(shù)可達(dá)10以上;(3)最佳分化培養(yǎng)基為:1/2 MS+6-BA0.2 mg/L+NAA1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+土豆汁15％+瓊脂4.0 g/L，分化率可達(dá)90％;(4)最佳壯苗生根培養(yǎng)基配方為:N6+0.1 mg/L

4、 KT+0.5 mg/L IAA+蔗糖30 g/L+土豆汁15％+活性炭0.5g/L+瓊脂4.0 g/L，生根率可達(dá)100％。
　　2.以流蘇石斛原球莖作為受體材料，通過篩選卡那霉素和羧芐青霉素的工作濃度后，利用正交試驗設(shè)計對農(nóng)桿菌介導(dǎo)流蘇石斛遺傳轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:(1)卡那霉素濃度為200mg/L能夠有效抑制非轉(zhuǎn)化材料的生長，可作為抗性植株初步篩選的濃度;(2)羧芐青霉素濃度為200 mg/L能夠完全抑制農(nóng)桿菌的