運動神經元疾病的基因分析與診斷.pdf

1、研究目的： 1.研究在我院門診或病房就診的ALS患者SODl基因的突變類型，分析其基因型和表型的關系。 2.研究在我院門診或病房就診的下運動神經元病(LMND)患者SMN基因的缺失情況，以一步明確診斷。 3．研究我院門診或病房就診的男性LMND患者AR外顯子1的CAG三核苷酸的重復個數，以明確SBMA的診斷。 研究方法： 從研究對象的外周血的白細胞中提取基因組DNA。 1．PCR擴增ALS

2、患者SOD1基因的5個外顯子，產物純化后測序分析，尋找突變。 2．PCR擴增LMND患者SMN基因的7號外顯子，Dra Ⅰ酶切后產物進行6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，觀察有無條帶缺失。 3．PCR擴增男性LMND患者AR基因的1號外顯子，產物進行1．5％瓊脂糖和6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，陽性可疑樣本純化后測序分析，明確CAG三核苷酸的重復個數。 研究結果： 1．49名ALS患者包括48名散發(fā)病例及

3、1名FALS患者。發(fā)現此。FALS患者有SOD1基因外顯子2的H46R的雜和突變，即CAT→CGT，使得46位編碼子由編碼組氨酸突變?yōu)榫幋a精氨酸。為國內首次報道，國際上只有日本人有報道，而歐美多年多家中心均未報道此突變，推測可能為亞裔所特有。先證者48歲，女性，來自-100個人的大家系，43歲起病，主要表現為肢體的無力和萎縮。此家系中的其他3名受累患者的首發(fā)癥狀與先證者相似，病情進展均較緩慢，生存期限均較長。 2．在43名LMN

4、D患者中，發(fā)現兩名男性患者有SMNl外顯子7的純和缺失，臨床可定為Ⅲ、Ⅳ型SMA。其中一名為22歲的青年男性，16歲起病，病情進展緩慢，目前為一名大學生，生活完全可以自理。另一名為55歲的中年男性，52歲起病，病情進展迅速，球部受累，目前氣管切開呼吸機輔助通氣。另兩名男性患者有SMN2外顯子7的純和缺失，其中一名SMN2缺失的為CAG重復個數為50的肯尼迪病患者。 3．在31名男性LMND患者中，發(fā)現三名肯尼迪病患者，其AR基因

5、外顯子1的CAG三核苷酸重復序列個數分別為49、50、52。CAG三核苷酸重復序列為49的是一名52歲的中年男性，46歲起病，主要表現為四肢無力和引水嗆咳，現病情平穩(wěn)。CAG重復個數為50的是一名46歲的中年男性，41歲起病，主要表現為四肢無力與萎縮，現病情平穩(wěn)。CAG重復序列為52的是一名51歲的中年男性，37歲起病，主要表現為四肢無力與萎縮及吞咽呼吸困難，因肺部感染已死亡。另選兩名成年健康男性對照，其個數分別為24、26。