基于數(shù)字基因表達(dá)譜的蛹黑突變及正常品系甜菜夜蛾表皮蛋白基因CPR97和CPR63的研究.pdf

1、昆蟲表皮的主要成分是幾丁質(zhì)和表皮蛋白。一直以來，表皮蛋白種類和數(shù)量的變化被認(rèn)為是影響昆蟲表皮結(jié)構(gòu)和功能的主要因素。
　　甜菜夜蛾是一種世界性的雜食性害蟲，在我國分布范圍廣，且寄主植物種類多樣。甜菜夜蛾蛹黑突變體由本實(shí)驗(yàn)室正常體甜菜夜蛾于室內(nèi)正常飼養(yǎng)條件下突變而來，蛹黑性狀能穩(wěn)定遺傳且未發(fā)生性狀分離。
　　本研究以蛹黑突變和正常品系甜菜夜蛾為研究對(duì)象，第二代高通量測(cè)序?yàn)槠脚_(tái)，對(duì)2個(gè)品系甜菜夜蛾的5齡幼蟲、預(yù)蛹、0小時(shí)蛹的表皮組

2、織進(jìn)行數(shù)字基因表達(dá)譜升級(jí)版測(cè)序。主要研究結(jié)果如下:
　　1通過高通量測(cè)序由正常體甜菜夜蛾5齡、預(yù)蛹、蛹的表皮組織樣本中分別得到了350734013bp，346909171bp，345310840bp的核苷酸序列，reads數(shù)目分別為7157837，7079779，7079779。在蛹黑突變體甜菜夜蛾5齡、預(yù)蛹、蛹的表皮組織樣本中分別得到了7397772，7188944，7305754個(gè)reads，核苷酸序列長度分別為3624908

3、28bp，352258256bp，357981946bp。以甜菜夜蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為參考基因進(jìn)行注釋，6個(gè)表達(dá)譜測(cè)序數(shù)據(jù)中的reads的比對(duì)率基本維持在75％，其中蛹黑突變品系的5齡幼蟲的reads比對(duì)率偏低，為65.35％。
　　2在差異基因篩選中，5齡幼蟲蛹黑突變體較正常體甜菜夜蛾有7257個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，664個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。預(yù)蛹中460個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，439個(gè)基因表達(dá)下調(diào);0小時(shí)蛹中162個(gè)基因表達(dá)上調(diào);293個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。

4、
　　3在甜菜夜蛾3個(gè)時(shí)期的表皮組織中，均篩選到了多個(gè)表皮蛋白基因的表達(dá)有顯著性差異。其中，在預(yù)蛹時(shí)期有9個(gè)表皮蛋白基因顯著性上調(diào)，上調(diào)倍數(shù)最大為23.6，僅有一個(gè)表皮蛋白基因表達(dá)量下調(diào)，下調(diào)倍數(shù)為212;在蛹期5個(gè)表皮蛋白基因表達(dá)顯著性上調(diào)，上調(diào)倍數(shù)最大為210.3倍。
　　4通過熒光定量PCR分析目的基因CPR97在2個(gè)品系甜菜夜蛾預(yù)蛹晚期、化蛹初期中的表達(dá)量。在預(yù)蛹晚期和化蛹初期，蛹黑突變體中CPR97基因的表達(dá)量均高