抗寒梨種質(zhì)資源RAPD的分子標(biāo)記及其核心種質(zhì)初步構(gòu)建.pdf

1、抗寒梨種質(zhì)資源是寒地果樹資源的寶貴財(cái)富，對(duì)其深入研究有利于今后更科學(xué)有效的保存與利用。本試驗(yàn)主要以RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA)分子標(biāo)記為主要研究方法。對(duì)抗寒梨種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行研究，揭示不同種間的親緣關(guān)系及其分類地位；尋找不同種質(zhì)的特有RAPD標(biāo)記，為今后的種質(zhì)鑒定、育種親本選擇及其雜交后代性狀預(yù)測(cè)、早期選擇提供研究依據(jù)；并初步構(gòu)建抗寒梨的核心種質(zhì)，便于資源的高效管理及遺傳多樣性的準(zhǔn)確利用。主要研究?jī)?nèi)容如下： 1.用SD

2、S方法，提取了梨基因組DNA，并對(duì)提取液成分進(jìn)行了改進(jìn)，提高DNA的質(zhì)量和產(chǎn)量。 2.優(yōu)化了RAPD反應(yīng)體系。所得最優(yōu)反應(yīng)體系為：反應(yīng)體積25μl其中模板DNA 20 ng/μl，引物1.0μl濃度10pM，TaqDNA聚合酶1.0U，dNTP 0.2 mmol/L，PCR Buffer(含Mg<'2+>)2.5μl。擴(kuò)增程序?yàn)椋侯A(yù)變性94℃4min，變性94℃45s，退火溫度(37℃)45s，72℃延伸120s，共35個(gè)循環(huán)后

3、，在72℃繼續(xù)延伸5min，然后在4℃保存。 3.利用RAPD技術(shù)對(duì)抗寒梨107份種質(zhì)資源遺傳變異進(jìn)行了研究，從180個(gè)10 bp隨機(jī)引物中篩選出13個(gè)多態(tài)性引物用于正式擴(kuò)增，共擴(kuò)增出105條DNA帶，其中多態(tài)性DNA帶99個(gè)，多態(tài)性百分比達(dá)到94.3％。平均每個(gè)引物擴(kuò)增的DNA帶數(shù)目為8條。 4.有6份資源擴(kuò)增出了一個(gè)以上的特有RAPD標(biāo)記，據(jù)此可以進(jìn)行資源鑒定或以此親本的雜交后代早期選擇。 5.利用DNA擴(kuò)增

4、結(jié)果構(gòu)建了初級(jí)核心種質(zhì)84份，并對(duì)其進(jìn)行再聚類分析，得到結(jié)論如下： ①驗(yàn)證了前人對(duì)秋子梨系統(tǒng)、白梨系統(tǒng)、西洋梨系統(tǒng)的經(jīng)典分類。但一些野生種的親緣關(guān)系與經(jīng)典分類學(xué)存在差別，待進(jìn)一步深入研究。 ②通過聚類分析樹狀圖及蘋果梨和其他品種的相似系數(shù)表明：蘋果梨和白梨系統(tǒng)的品種聚在一起，雖然在表型性狀是白梨和砂梨的雜和體，顯示出蘋果梨與白梨有較近的親緣關(guān)系，在分類地位上應(yīng)歸屬于白梨系統(tǒng)。 6.首次嘗試對(duì)抗寒梨種質(zhì)資源進(jìn)行核心