胃癌CHFR、RUNX3基因啟動子區(qū)異常甲基化的研究.pdf

1、目的：本研究通過檢測胃癌組織、癌旁5cm組織與和正常對照組織以及相對應的術前、術后血清中CHFR基因和RUNX3基因啟動子區(qū)的甲基化水平，探討它們在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及與臨床資料參數(shù)之間的聯(lián)系；另外比較甲基化特異性PCR（Methylation-specific PCR，MSP）方法與結(jié)合重亞硫酸鹽限制性內(nèi)切酶法(combined bisulfite restriction analysis，COBRA)在檢測胃癌抑癌基因甲基化水平

2、上的差異性。
　　 方法：選擇經(jīng)病理確診的原發(fā)性胃癌患者，胃癌患者術前均未行放療和化療，收集胃癌根治術后腫瘤組織和配對的癌旁5cm組織各123例，正常對照組織30例，同時收集78例術前、術后血清。采用目前常用的MSP法、COBRA法檢測上述標本中的CHFR與RUNX3基因啟動之區(qū)甲基化的狀態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 1.CHFR基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化胃癌組織中CHFR基因甲基化陽性率為41.5％(51/1

3、23)，癌旁組織為11.4％(14/123)，正常組織為0％(0/30)，前組與后兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 CHFR基因在分化程度為G3/G4的胃癌組織中的甲基化陽性率顯著高于G1/G2的甲基化陽性率，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在腫瘤直徑≥5cm的胃癌組織中的甲基化陽性率顯著高于其在＜5cm的胃癌組織的甲基化陽性率(P＜0.05)，而其異常甲基化在患者年齡、性別、腫瘤浸潤深度、病理分期以及淋巴

4、結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料參數(shù)中的差異不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 CHFR基因在術前血清中的甲基化陽性率為20.5％（16/78），顯著高于術后血清中的甲基化陽性率2.6％（2/78），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而且，外周血清中基因甲基化水平與相應的癌組織中相同基因的甲基化水平存在一致性(P＜0.05，Kappa值為0.521)。
　　 2.RUNX3基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化胃癌組織中RUNX3基因

5、甲基化陽性率為55.3％(68/123)，癌旁組織為9.8％(12/123)，而正常組織為0％(0/30)，前組與后兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 RUNX3基因在浸潤深度為T3/T4的胃癌組織中的甲基化陽性率顯著高于其在T1/T2的胃癌組織的甲基化陽性率(P＜0.05)，在腫瘤直徑≥5cm的胃癌組織中的甲基化陽性率顯著高于其在＜5cm的胃癌組織的甲基化陽性率(P＜0.05)，而其異常甲基化在患者年齡、性別、組

6、織分化程度、病理分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料參數(shù)中的差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 RUNX3基因在術前血清中的甲基化陽性率為28.2％（22/78），顯著高于術后血清中的甲基化陽性率2.6％（2/78），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而且，外周血清中基因甲基化水平與相應的癌組織中相同基因的甲基化水平存在一致性(P＜0.05，Kappa值為0.377)。
　　 3.MSP、COBRA兩種方法在檢測胃癌組

7、織中CHFR基因啟動子區(qū)甲基化陽性率的比較。
　　 在檢測64例胃癌組織CHFR基因啟動子區(qū)甲基化陽性率中，MSP方法測定的甲基化陽性率為51.6％（33/64），與COBRA方法檢測的結(jié)果42.2％（27/64）相比較，差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.胃癌組織和血清中存在CHFR和RUNX3基因啟動子區(qū)的異常甲基化，且具有一致性，參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測多個基因啟動子區(qū)的

8、甲基化狀態(tài)可能為胃癌的診斷提供一種新的方法，有助于胃癌的臨床篩選。
　　 2.CHFR基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化與胃癌組織的分化程度密切相關，可作為評估胃癌組織分化程度的參考指標。
　　 3.RUNX3基因啟動子區(qū)的異常甲基化與胃癌的浸潤深度密切相關，可以作為評價腫瘤浸潤深度的檢測指標。
　　 4.RUNX3和CHFR基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化與腫瘤大小顯著相關，可作為評估胃癌生長的參考指標。<