組蛋白去乙?；敢种苿?duì)黑素瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控及機(jī)制研究.pdf

1、惡性黑素瘤是惡性程度最高的皮膚腫瘤，臨床上迫切需要新型的治療策略。組蛋白去乙酰化酶抑制劑是一種極具前景的新型抗腫瘤藥物，其作用機(jī)制和抗腫瘤作用仍在研究中。本研究用經(jīng)典組蛋白去乙?；?HDAC)抑制劑曲古抑菌素A(TSA)研究組蛋白乙酰化對(duì)惡性黑素瘤基因表達(dá)和細(xì)胞周期、凋亡及侵襲性的影響，并以其為對(duì)照，首次研究我國研發(fā)的第一個(gè)組蛋白去乙酰化酶抑制劑西達(dá)本胺對(duì)黑素瘤細(xì)胞的影響，并探討其作用機(jī)制。 ①HDAC1和HDAC2在黑素瘤組

2、織中的表達(dá)。經(jīng)免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HDAC1、HDAC2在皮膚黑素瘤組織中的表達(dá)明顯增加，與良性色素痣組織對(duì)比，有顯著性差異。 ②西達(dá)本胺和曲古抑菌素A對(duì)黑素瘤A375細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。經(jīng)MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同濃度西達(dá)本胺和曲古抑菌素A干預(yù)后，A375細(xì)胞增殖明顯受抑，凋亡增加，并分別出現(xiàn)G0/G1期阻滯和G2/M期阻滯。在一定的時(shí)間和濃度范圍內(nèi)，藥物抑制增殖作用呈時(shí)效和量效關(guān)系。西達(dá)本胺和曲古抑菌素A作用48h的IC50

3、分別為250μmol/L和0.7μmol/L。經(jīng)RT-PCR檢測(cè)，西達(dá)本胺干預(yù)24h后細(xì)胞周期蛋白p21WAF1/CIP1mRNA表達(dá)增加。 ③黑素瘤A375細(xì)胞組蛋白乙酰化狀況及西達(dá)本胺對(duì)其影響。經(jīng)過RT-PCR、蛋白印記法檢測(cè)，西達(dá)本胺干預(yù)后HDAC1在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平表達(dá)增加，HDAC2表達(dá)無明顯變化。染色質(zhì)總乙?；M蛋白H3、H4水平增加。染色質(zhì)免疫沉淀法結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR法發(fā)現(xiàn)p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子區(qū)組蛋白乙

4、?；皆黾印?④曲古抑菌素A對(duì)黑素瘤A375細(xì)胞侵襲能力的影響。經(jīng)重組基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)、趨化運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)、細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)及明膠酶譜法檢測(cè)表明，TSA能減弱A375細(xì)胞和基底膜的體外黏附能力，抑制明膠酶MMP—2的活性，并在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)VEGF的表達(dá)，但是明顯增強(qiáng)A375細(xì)胞的體外趨化運(yùn)動(dòng)能力。TSA對(duì)A375細(xì)胞的侵襲性沒有明顯抑制。 研究表明：組蛋白乙?；赡軈⑴c了黑素瘤的發(fā)生、發(fā)展，并可能為黑素瘤的表觀遺傳學(xué)發(fā)生機(jī)制之一。