豬精液冷凍技術(shù)的研究與應(yīng)用.pdf

1、豬精子結(jié)構(gòu)的特殊性使其對溫度變化特別敏感，在冷凍解凍過程中極易受到損傷，導(dǎo)致豬冷凍精液的生產(chǎn)難度大、操作程序復(fù)雜，極大的限制了豬冷凍精液的推廣與應(yīng)用。然而豬精液冷凍對提高優(yōu)秀種公畜的利用率：開展瀕臨絕種的優(yōu)良品種的保種、育種工作等都有重要的意義；另外，凍精與體外受精、人工授精技術(shù)相結(jié)合，建立高效的體外胚胎生產(chǎn)體系，大量生產(chǎn)質(zhì)優(yōu)、價廉、一致性好的胚胎對現(xiàn)代生物工程技術(shù)以及畜牧業(yè)生產(chǎn)的研究與發(fā)展也具有深遠(yuǎn)的現(xiàn)實意義。因此，深入系統(tǒng)地研究豬精

2、液冷凍機理和生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)，探討影響豬凍精活率及受精能力的因素，進一步優(yōu)化豬精液冷凍方法，提高精液冷凍的效率，已成為國內(nèi)外養(yǎng)豬生產(chǎn)中急待解決的問題。 本實驗以解凍后的精子活率、頂體完整率和體外受精(IVF)、人工授精(AI)結(jié)果作為判定指標(biāo)，探討了稀釋液配方、冷源和Equex．STM對豬精液顆粒冷凍效果的影響。手握法采集成年、健康種公豬精液，進行兩步法稀釋，比較了目前常用的三種稀釋液配方，發(fā)現(xiàn)1號稀釋液顯著優(yōu)于2、3號稀釋液；分

3、別采用添加Equex．STM的1號稀釋液和普通稀釋液，以干冰或液氮為冷源進行精液冷凍。結(jié)果如下：以干冰為冷源滴凍精液凍后活率為48.8±4.7％、頂體完整率為78.2±4.0％，而以液氮為冷源的方法凍后活率為33.3±5.6％、頂體完整率為55.8±6.8％，前者在這兩項指標(biāo)上顯著優(yōu)于后者(P<0.05)。另外，在稀釋液中添加Equex．STM，以干冰為冷源進行滴凍，頂體完整率為79.5±2.8％，與為添加Equex．STM實驗組(項體

4、完整率為57.9±7.7％)相比，凍精頂體完整率顯著提高。結(jié)合體外受精(IVF)和人工授精(AI)技術(shù)，對添加Equex．STM的稀釋液、以干冰為冷源滴凍的凍精進行質(zhì)量評定。通過添加10％卵泡液(PFF)和10％胎牛血清(FBS)優(yōu)化卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系，然后進行IVF，其中凍精I(xiàn)VF卵裂率、囊胚率分別為53.2±1.3％和21.6±5.3％。利用凍精進行低劑量人工授精的嘗試，以有效精子數(shù)5000萬的凍精進行子宮內(nèi)深部輸精取得成功，