抗綠膿桿菌的活性物質(zhì)篩選及其有效成分分析.pdf

1、綠膿桿菌作為三大機(jī)會(huì)致病菌之一,對機(jī)體免疫功能低下人群有強(qiáng)致病性。隨著免疫抑制劑、廣譜抗生素、化療和各種侵入性診治措施增多,此菌的臨床感染率逐年增高。目前抗綠膿桿菌感染的治療主要依賴多種抗生素,然而大量綠膿桿菌多藥耐藥菌株近年來不斷出現(xiàn),使得感染后的治療越來越困難。抗菌肽(或抗菌蛋白)是一類普遍存在于生物體內(nèi)的陽離子兩親性多肽,具有抗菌譜廣、作用強(qiáng)、起效快、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),已日益引起了人們的廣泛關(guān)注,成為一類極具開發(fā)潛力的新型抗感

2、染制劑。然而,目前針對綠膿桿菌的抗菌肽(抗菌蛋白)的研究報(bào)道較少。本研究的主要目的是從微生物中篩選拮抗綠膿桿菌的菌株,并對其活性成分進(jìn)行分離和鑒定,為將來進(jìn)行新型抗綠膿桿菌藥物研究奠定基礎(chǔ)。
　　主要研究內(nèi)容:
　　1.拮抗綠膿桿菌的微生物篩選。從土壤樣品中篩選對綠膿桿菌有拮抗作用的菌株,進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及16S rDNA序列分析,確定其分類地位。
　　2.拮抗綠膿桿菌的活性成分表達(dá)條件優(yōu)化。對不同培養(yǎng)基、pH值、溫度和

3、時(shí)間等條件下,抗綠膿桿菌成分的活性進(jìn)行比較,獲取適宜的發(fā)酵條件。
　　3.拮抗綠膿桿菌的活性成分的純化。收集發(fā)酵液,采用硫酸銨沉淀、離子交換、分子篩等方法從發(fā)酵上清中純化目的蛋白。
　　4.拮抗綠膿桿菌的活性成分的特性分析。測定活性成分的酸堿穩(wěn)定性,蛋白酶K敏感性,高溫耐受性,分子量,等電點(diǎn)(pI)等特性。
　　主要研究結(jié)果:
　　1.從土壤樣品中篩選出了5株對綠膿桿菌有拮抗作用的菌株。經(jīng)菌落形態(tài)、革蘭氏染色等形

4、態(tài)學(xué)觀察,16S rDNA擴(kuò)增、測序及RDP序列分析,明確了所篩選的菌株分屬假單胞菌屬(Pseudomonad aceae)和不動(dòng)細(xì)菌屬(Acinetobacter)。
　　2.以篩選出的B1505菌為供試菌,從11種培養(yǎng)基中優(yōu)選出最適宜拮抗綠膿桿菌活性成分表達(dá)的培養(yǎng)基(酵母膏3 g/L,胰蛋白胨5 g/L,NaCl3 g/L,葡萄糖5 g/L)。該活性成分的最適發(fā)酵pH值為7.0、最適溫度為37℃。在上述條件下,250 rpm培