菜蛾盤絨繭蜂多分DNA病毒基因在寄主小菜蛾幼蟲體內(nèi)轉(zhuǎn)錄模式的研究.pdf

1、多分DNA病毒(PDV)是與膜翅目姬蜂科和繭蜂科寄生蜂共存的一類獨(dú)特病毒。它在寄生蜂成功寄生過程中起著不可替代的作用，是寄生蜂克服寄主免疫、適應(yīng)寄主內(nèi)部營養(yǎng)條件并使之滿足其自生發(fā)育需要的重要因子。本文首先用PCR方法驗(yàn)證了75個(gè)菜蛾盤絨繭蜂多分DNA病毒(CvBV)待選基因中的64個(gè)基因，然后以此為基礎(chǔ)，用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)獲得17個(gè)基因的cDNA全長，并且用qRT-PCR的方法對其中38個(gè)基因在寄主不同組織中的轉(zhuǎn)錄模

2、式進(jìn)行了初步研究。現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下:
　　1.將CvBV基因組序列與寄生后小菜蛾幼蟲轉(zhuǎn)錄組EST序列進(jìn)行交叉比對后，得到75個(gè)待選基因片段，它們大小在300bp到1940bp之間。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)這些基因來自于CvBV的7個(gè)基因家族，它們分別是:蛋白酪氨酸去磷酸化酶基因(Protein tyrosinephosphatase，PTP)（30個(gè)）、BEN（7個(gè)）、錨蛋白（Ankyrin，6個(gè)）、凝集素（Lectin，2個(gè)）、P94-l

3、ike（2個(gè)）、CrV1-like（1個(gè)）和組蛋白（Histone，1個(gè)）。其余基因除小部分在其他繭蜂多分DNA病毒中有同源序列，在此命名為Conserved hypothetical protein（Con，9個(gè)）外，大部分為無同源序列的新基因，在此命名為Hypothetical protein（Hyp，17個(gè)）。
　　2.通過反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）的方法對75個(gè)待選基因片段進(jìn)行驗(yàn)證，其中64個(gè)EST片段為陽性片段，他們分

4、別是:PTP（27個(gè)）、BEN（6個(gè)）、Lectin（2個(gè)）、P94-like（2個(gè)）、Ankyrin（1個(gè)）、CrV1-like（1個(gè)）、Con（9個(gè)）和Hyp（16個(gè)）。
　　3.采用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)獲得了17個(gè)CvBV基因的全長cDNA，依據(jù)它們在CvBV基因組不同片段上的位置，依次命名為c3-3、c4-6、c6-2、c6-5、c6-6、c7-7、c9-1、c12-4、c12-6、c12-9、c14-1、

5、c15-2、c24-8、c28-1、c28-5、c29-7和c30-1，它們分別編碼107、252、304、320、304、238、259、300、297、287、323、340、252、277、312、526和82個(gè)氨基酸的蛋白，其中僅c3-3、c7-7和c15-2含有信號肽序列。通過對9個(gè)獲得cDNA全長的PTP進(jìn)行了基于氨基酸序列的生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)其中7個(gè)為具有催化活性的PTP。
　　4.明確了CvBV侵染寄主后，本研究

6、所涉及的38個(gè)CvBV基因均主要在寄生后小菜蛾幼蟲的血細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，它們的轉(zhuǎn)錄模式可以分為三種情況:轉(zhuǎn)錄水平隨寄生后時(shí)間的增加而(1)先升后降;(2)持續(xù)升高和(3)持續(xù)下降，其中c3-3、c6-6、c6-7、c12-9、c13-1、c14-1、c16-1、c18-1、c22-1、c24-8、c27-2和c28-6的轉(zhuǎn)錄模式為先升后降，c4-1、c4-3、c4-6、c6-2、c9-1、c12-6、c17-1、c27-1和c28-1的轉(zhuǎn)錄模