二甲雙胍對多囊卵巢模型大鼠血清激素含量及卵巢AQP8、AQP9表達的影響.pdf

1、目的:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是涉及神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝及卵巢局部等多種調(diào)控因素，表現(xiàn)為排卵障礙、高雄激素血癥及高胰島素血癥或胰島素抵抗為主的復(fù)雜性、異質(zhì)性臨床綜合癥。卵泡體積的急驟增大需要大量的水轉(zhuǎn)運，目前已經(jīng)知道水轉(zhuǎn)運機制主要通過細胞膜上的結(jié)構(gòu)蛋白，即水通道蛋白（aquaporin，AQP），水通道蛋白能快速而大量地轉(zhuǎn)運水通過細胞膜。水通道蛋自是圭要結(jié)構(gòu)蛋白(MIP)家族成員之(一

2、)，已發(fā)現(xiàn)在細菌到人類約有80個以上AQP蛋白。對于伴有胰島素抵抗的PCOS患者，提高胰島素敏感的藥物逐漸應(yīng)用臨床，二甲雙胍最為常用。因此本研究通過皮下注射雄激素的方法，建立PCOS大鼠模型，該模型與人類PCOS的代謝特點相似，并給予二甲雙胍治療，在此基礎(chǔ)上觀察AQP在正常大鼠及PCOS大鼠中表達的變化及二甲雙胍的干預(yù)作用，從而進一步研究和探討多囊卵巢綜合征的發(fā)病機制及二甲雙胍對PCOS的治療作用。
　　方法:21日齡雌性SD大鼠

3、45只，適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后，從中隨機抽取11只作為正常對照組(NC組)，17只作為PCOS模型組（MO組），17只作為二甲雙胍治療組(MF組)。MO組及MF組大鼠每日皮下注射1mg/100g體重的丙酸睪酮溶液，對照組同期皮下注射等體積的生理鹽水，連續(xù)5周。5周后檢測MO組及MF組大鼠血清睪酮升高及宮頸粘液涂片連續(xù)出現(xiàn)羊齒狀結(jié)晶者符合PCOS模型。造模成功后MF組每天給予二甲雙胍200mg/kg，用無菌蒸餾水溶解灌胃，NC組及MO組每天給予

4、等體積蒸餾水灌胃，連續(xù)3周。在MF組最后1次用藥24h后，各組大鼠行水合氯醛麻醉，快速心臟缺血法致死，測空腹血糖(FBG)，收集血液分離血清，放射免疫法測睪酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、胰島素（FINS），免疫組化法測定AQP8、AQP9，留取雙側(cè)卵巢組織稱重，進行病理學(xué)HE染色觀察卵巢形態(tài)學(xué)變化。采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　1實驗前三組大鼠體重無

5、差異，8周末MO組大鼠體重較NC組無差異（P＞0.05），MF組大鼠較NC組及MO組體重下降（P＜0.05），MO組、MF組卵巢重量、卵巢重量/體重較NC組增加(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，但MF組卵巢重量、卵巢重量/體重較MO組下降（P＜0.05）。
　　2實驗5周末MO組及MF組大鼠中除5只大鼠恢復(fù)排卵外，余29只大鼠動情周期失去規(guī)律性變化，均為羊齒狀結(jié)晶，提示無排卵,NC組大鼠保持規(guī)律的動情周期

6、，羊齒狀結(jié)晶及橢圓體均可見。8周末MO組大鼠涂片均為羊齒狀結(jié)晶，仍未恢復(fù)排卵，MF組大鼠部分恢復(fù)排卵，NC組大鼠仍保持規(guī)律的動情周期。
　　3 MO組及MF組大鼠卵巢體積增大，色蒼白，表面可見擴張的囊泡，白膜增厚。NC組大鼠卵巢色澤紅，表面光滑。HE染色鏡檢，MO組大鼠卵巢可見早期發(fā)育較多的小卵泡及閉鎖卵泡，囊狀擴張卵泡明顯，卵泡內(nèi)卵母細胞消失，顆粒細胞層數(shù)減少，卵泡膜細胞增生，黃體數(shù)量明顯下降，卵巢白膜增厚。MF組也有上述變化，

7、但程度較MO組減輕。NC組鏡下卵巢結(jié)構(gòu)清晰，可見多個黃體及不同發(fā)育階段的卵泡，顆粒細胞呈多層，形態(tài)完整,排列整齊。
　　4實驗8周末MO組大鼠血清T較NC組升高，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），E2，P較NC組下降（P＜0.05，P＜0.05)，但LH，F(xiàn)SH，LH/FSH較NC組無差異(P＞0.05，P＞0.05，P＞0.05)。MF組血清T較MO組無差異，但仍高于NC組(P＞0.05)，E2較MO組升高，但無明顯差異（P＞0.0

8、5），而P較MO組升高，有明顯差異（P＜0.05），LH，F(xiàn)SH，LH/FSH較MO組、NC組仍無差異(P＞0.05，P＞0.05，P＞0.05)。
　　5 MO組大鼠8周后FBG，F(xiàn)INS，HOMA-IR較NC組均升高，有明顯差異(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，MF組FBG，F(xiàn)INS，HOMA-IR較MO組明顯下降(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)。
　　6分析:卵巢組織中AQP8、AQP9分別與P

9、成負相關(guān)（P＜0.05），與卵巢重量/體重，T，F(xiàn)INS，HOMA-IR，成正相關(guān)(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，與E2，LH/FSH，F(xiàn)BG無相關(guān)性(P＞0.05，P＞0.05，P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1應(yīng)用皮下注射雄激素法構(gòu)建的PCOS大鼠模型，其排卵功能障礙及相應(yīng)的代謝紊亂與人類相似，且該模型有一定的穩(wěn)定性，因此此模型可用于研究PCOS的發(fā)病機制及干預(yù)因素對PCOS的直接作用。