人真皮間充質(zhì)干細胞對增生性瘢痕成纖維細胞α-SMA和DCN表達的影響.pdf

1、目的：初步探討人真皮間充質(zhì)干細胞對不同時期增生性瘢痕成纖維細胞α-SMA和DCN表達的影響，以探討間充質(zhì)干細胞用于增生性瘢痕的防治的可行性。
　　 方法：機械法聯(lián)合酶消化法分離培養(yǎng)人真皮間充質(zhì)干細胞(hDMSCs)和6個月、1年、2年增生性瘢痕瘢痕(hypertrophic scars，HS)成纖維細胞。取第三代生長良好的細胞，流式細胞學(FCM)檢測hDMSCs的CD分子，向成脂、成軟骨和成骨細胞誘導分化，鑒定真皮間充質(zhì)干細胞

2、。免疫細胞化學檢測角蛋白19(CK19)和波形蛋白(vimentin)鑒定間質(zhì)細胞。取第三代生長良好的貼壁hDMSCs和不同時期瘢痕成纖維細胞通過非接觸式transwell共培養(yǎng)體系培養(yǎng)21天，實時熒光-多聚合酶鏈反應(RealTime-PCR, PT-PCR)和蛋白電泳（Western-blot，WB）技術(shù)檢測成纖維細胞中α-平滑肌動蛋白（α-SMA）和核心蛋白多糖(decorin，DCN)）的mRNA表達和蛋白含量的變化，對照組分別

3、用相對應瘢痕成纖維細胞不經(jīng)任何處理普通六孔板培養(yǎng)21天。
　　 結(jié)果：hDMSCs高表達CD73，CD105，CD44，CD90等間充質(zhì)干細胞表面標志，不表達CD14，CD34，CD45等造血干細胞表面標志，經(jīng)誘導可以向成脂、成軟骨和成骨細胞分化。hDMSCs、成纖維細胞不表達CK19，陽性表達vimentin。與對照組相比，經(jīng)與5×104hDMSCs共培養(yǎng)處理后的成纖維細胞中α-SMA mRNA及蛋白表達降低，DCN mRNA