p38MAPK在小鼠成骨細(xì)胞增殖、分化和凋亡中的作用.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥及相關(guān)的骨折是全球性中老年婦女死亡率和致殘率升高的重要原因，隨著世界人口的老齡化，骨質(zhì)疏松癥將成為前所未有的公共衛(wèi)生問(wèn)題。 雌激素撤退與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有(PMOP)密切關(guān)系，但是雌激素替代治療在防治骨質(zhì)疏松癥的同時(shí)，明顯增加了心臟疾患、中風(fēng)及乳腺癌的發(fā)病率。應(yīng)運(yùn)而生的雷洛昔芬(RLX)等選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)，與雌激素相比，對(duì)心臟、乳腺的副作用明顯降低。但是，近年的臨床病例研究提示雷洛昔芬可能與惡性混合性

2、苗勒氏管腫瘤及子宮出血的發(fā)生有關(guān)。目前對(duì)于雌激素和雷洛昔芬治療骨質(zhì)疏松癥的確切機(jī)制尚不明確。因此深入探討SERM類藥物的作用機(jī)制，尋找新的組織選擇性更高的藥物成為亟待解決的問(wèn)題。本研究以雷洛昔芬和17β-雌二醇(17β-E<,2>)為藥物刺激因子，觀察p38MAPK信號(hào)通路在成骨細(xì)胞(OBs)增殖、分化和凋亡中的作用，旨在研究雷洛昔芬和17β-雌二醇是否在p38MAPK信號(hào)通路中存在不同，為新的骨質(zhì)疏松癥防治藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

3、 第一部分 p38MAPK在小鼠成骨細(xì)胞增殖和分化中的作用 目的：探討p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在成骨細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中的作用。 方法：取第一繼代BALB/c小鼠頭蓋骨來(lái)源的成骨細(xì)胞，藥物刺激組分別加入不同濃度17 β-雌二醇或雷洛昔芬；含阻斷劑組預(yù)先添加不同濃度的SB202190阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路后，再加17 β-雌二醇或雷洛昔芬；另設(shè)對(duì)照組。72小時(shí)后用MTT法和細(xì)胞周期測(cè)定法檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖能力

4、；PNPP法和RT-PCR法檢測(cè)成骨細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(ALP)的表達(dá)水平。 結(jié)論：17 β-雌二醇和雷洛昔芬能夠通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)小鼠成骨細(xì)胞的增殖和分化。 第二部分 p38MAPK在小鼠成骨細(xì)胞凋亡中的作用 目的：探討p38MAPK信號(hào)通路對(duì)小鼠成骨細(xì)胞凋亡的影響。 方法：酶消化法原代培養(yǎng)小鼠成骨細(xì)胞，取第一繼代成骨細(xì)胞并分組加藥：含藥物組加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬

5、(10<'-7>M)；含阻斷劑組預(yù)先添加SB202190(終濃度10 μM)，阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路后，再加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬(10<'-7>M)；另設(shè)對(duì)照組。無(wú)血清培養(yǎng)法誘導(dǎo)成骨細(xì)胞早期凋亡。Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞早期凋亡。 結(jié)論：17 β-雌二醇和雷洛昔芬能夠抑制成骨細(xì)胞的無(wú)血清凋亡；p38MAPK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯影響。 第三部分

6、p38MAPK對(duì)小鼠成骨細(xì)胞內(nèi)Col I α<,1>、TSP2、OPG和RANKL表達(dá)的影響 目的：探討p38MAPK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞內(nèi)Col I α<,1>、TSP2、OPG和RANKI表達(dá)的影響。 方法：取第一繼代BALB/c小鼠頭蓋骨來(lái)源的成骨細(xì)胞，藥物刺激組分別加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬(10<'-7>M)；含阻斷劑組預(yù)先添加SB202190(終濃度20 u M)阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)

7、導(dǎo)通路后，再加17 β-雌二醇或雷洛昔芬；另設(shè)對(duì)照組。72小時(shí)后收集細(xì)胞，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA，RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原α<,1>鏈(ColIα<,1>)、血小板反應(yīng)蛋白2(TsP2)、骨保護(hù)素(OPG)和核因子K B受體(RANKL)的表達(dá)水平。 結(jié)論：17 β-雌二醇或雷洛昔芬能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞內(nèi)TSP2、OPG和RANKL的表達(dá)，對(duì)OPG/RANKL無(wú)明顯影響；p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在Col α<,1>、TSP2、