苧麻野生種質(zhì)資源遺傳多樣性及其親緣關(guān)系分析.pdf

1、本文選取來自不同生態(tài)區(qū)域的苧麻野生種質(zhì)30份，地方栽培品種8份，運(yùn)用同工酶技術(shù)和RAPD、ISSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行苧麻野生種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析，得到如下結(jié)果： 1.同工酶分析結(jié)果顯示：38份材料共檢測到146條酯酶同工酶譜帶，統(tǒng)計(jì)表明每個栽培種產(chǎn)生酶帶數(shù)7～9條不等，野生種產(chǎn)生酶帶數(shù)1～5條不等。共有21條酶帶類型，遷移率在Rf0.381～0.835之間。聚類分析結(jié)果顯示材料間相似系數(shù)在0.429～1.00之間。在相

2、似系數(shù)0.79水平處，可以將材料分為5大類群。 2.RAPD-PCR.反應(yīng)體系的優(yōu)化，從差別較大的苧麻屬栽培種和序葉苧麻種中各選一個材料的DNA為模板，對RAPD擴(kuò)增體系進(jìn)行雙重正交優(yōu)化，優(yōu)化后的RAPD-PCR反應(yīng)體系適合于眾多苧麻屬植物。25 ul反應(yīng)體系中，引物濃度為0.75umol/L；模板DNA的用量為150 ng；Mg<'2+>濃度為2.1 mM；dNTP濃度為0.2 mM：Taq酶用量為1.5 U。擴(kuò)增程序?yàn)椋合?

3、4℃變性4 min，再94℃變性45see、37℃復(fù)性45 sec、72℃延伸90 sec共36個循環(huán)，最后72℃延伸10 min，4℃保存。 3.利用隊(duì)PD和ISSR兩種標(biāo)記對38份材料進(jìn)行了遺傳多樣性分析。統(tǒng)計(jì)表明：31條RAPD引物，擴(kuò)增出358條帶，平均產(chǎn)出率11.5條帶/條引物；而18對ISSR引物共擴(kuò)增出266條帶，平均產(chǎn)率14.8條帶/條引物。對該結(jié)果分別用NTSYS軟件進(jìn)行聚類分析結(jié)果表明：在0.73的相似水平上

4、，均可將38份材料分成8大類群，RAPD聚類分析體現(xiàn)材料分類結(jié)果有地域性。 4.將分子標(biāo)記RAPD、ISSR所得到的數(shù)據(jù)，用NTSYS軟件進(jìn)行混合分析，其聚類結(jié)果圖分別與RAPD和ISSR聚類圖比較，混合數(shù)據(jù)的聚類圖與ISSR分析聚類圖的結(jié)果比較接近。兩種標(biāo)記(RAPD和ISSR.)的分析結(jié)果呈極顯著相關(guān)(r=0.92027)。表明RAPD與ISSR均適合苧麻野生種質(zhì)資源遺傳多樣性分析，ISSR技術(shù)在苧麻野生種質(zhì)遺傳多樣性分析上