轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β對(duì)肌腱愈合和粘連影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:肌腱愈合過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1基因表達(dá)的變化 目的:了解兔屈趾肌腱Ⅱ區(qū)傷口愈合過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)基因表達(dá)的變化。 方法:60只成年新西蘭大白兔左前中趾Ⅱ區(qū)屈趾深肌腱被完全切斷并修復(fù)，分別于1、7、14、21、28、56天獲取肌腱，用原位雜交和免疫組化技術(shù)分析TGF-β1的表達(dá)情況。 結(jié)論:正常無(wú)損傷的肌腱和腱鞘細(xì)胞能產(chǎn)生TGF

2、-β1，當(dāng)肌腱損傷后，細(xì)胞因子被激活，增加的細(xì)胞因子主要由肌腱細(xì)胞與腱鞘細(xì)胞產(chǎn)生，此結(jié)果與肌腱的內(nèi)、外源性愈合機(jī)制是一致的。 第二部分:肌腱愈合過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1受體表達(dá)的變化 目的:了解兔屈趾肌腱Ⅱ區(qū)傷口愈合過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforminggrowthfactorβ1Receptors，TGF-βR1)在不同時(shí)間和部位的表達(dá)情況。 方法:42只成年新西蘭大白兔左前中趾Ⅱ區(qū)屈趾深肌腱被完全

3、切斷并修復(fù)，分別于1、7、14、21、28、56天獲取肌腱(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只)，對(duì)照組取沒(méi)有損傷和修復(fù)的屈趾肌腱(6只)，用Westernblot和免疫組化技術(shù)分析TGF-βR1的表達(dá)情況。 結(jié)論:肌腱損傷修復(fù)后，肌腱和腱鞘TGF-βR1的表達(dá)明顯增加，在術(shù)后14天達(dá)到高峰，56天開(kāi)始降低，這種受體上調(diào)可能為屈指肌腱術(shù)后疤痕形成的生物學(xué)調(diào)節(jié)提供新的途徑。 第三部分:轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1對(duì)肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞增殖和膠原

4、產(chǎn)生的影響 目的:探討兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞增殖、膠原產(chǎn)生和TGF-β1對(duì)細(xì)胞的增殖和膠原產(chǎn)生的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞并培養(yǎng)，測(cè)量使用TGF-β1培養(yǎng)后，細(xì)胞的數(shù)量和膠原產(chǎn)生量，并與不使用TGF-β1培養(yǎng)的對(duì)照組比較。另外，通過(guò)RT-PCR反應(yīng)測(cè)定使用TGF-β1前后各種細(xì)胞Ⅰ型膠原基因的表達(dá)。 結(jié)論:調(diào)節(jié)TGF-β1的水平能調(diào)節(jié)膠原的產(chǎn)生，可能為臨床上防止肌腱粘連提供

5、新的途徑。 第四部分:乳酸對(duì)肌腱細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β表達(dá)的調(diào)節(jié)作用 目的:探討乳酸對(duì)兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞TGF-β及其受體產(chǎn)生的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞并分別進(jìn)行培養(yǎng)，在使用25mmol/L的乳酸培養(yǎng)后，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量檢測(cè)TGF-β及其受體的表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用原位雜交技術(shù)測(cè)量TGF-β1mRNA的表達(dá)。 結(jié)論:乳酸能顯著增加肌腱細(xì)胞的TGF-β、TGF-β受體

6、和TGF-β1mRNA的表達(dá)，因此為肌腱愈合過(guò)程中調(diào)節(jié)TGF-β水平提供新的途徑。 第五部分:乳酸對(duì)肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞增殖和生物學(xué)活性的影響 目的:探討兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞增殖、膠原產(chǎn)生和乳酸對(duì)細(xì)胞的增殖、膠原產(chǎn)生和對(duì)TGF-β1、b-FGF、IL-8分泌的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細(xì)胞并培養(yǎng)，測(cè)量使用乳酸培養(yǎng)后，細(xì)胞的數(shù)量，膠原產(chǎn)生量和TGF-β1、b-FGF、I