豬THRSP基因啟動(dòng)子SNP及其對基因表達(dá)的影響.pdf

1、豬肉是中國消費(fèi)者動(dòng)物蛋白質(zhì)來源之一，豬肉品質(zhì)一直倍受人們的關(guān)注。豬肉中的脂肪及其含量是豬肉品質(zhì)和風(fēng)味形成的重要決定因素，決定了豬肉的多汁性和口感。THRSP基因參與調(diào)控豬肉脂肪沉積，該基因的變異是調(diào)節(jié)脂肪合成和分解相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)鍵因素。
　　本研究以定遠(yuǎn)豬類群為材料，檢測獲得THRSP基因啟動(dòng)子區(qū)5個(gè)SNP位點(diǎn)，構(gòu)建了5個(gè)基因型的雙螢光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒，并與pRL-CMV質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，利用熒光素酶檢測系統(tǒng)對轉(zhuǎn)染細(xì)胞

2、進(jìn)行檢測，分析不同基因型啟動(dòng)子的效率，并通過THRSP基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR和不同類型豬該基因的頻率分布驗(yàn)證結(jié)果，分析啟動(dòng)子SNP位點(diǎn)與THRSP基因表達(dá)之間的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果表明：
　　研究所發(fā)現(xiàn)的5個(gè)突變位點(diǎn)分別是位于CDS上游的A-95T、G-98A、A-376G、T-400C和 C-459T，并且位于THRSP基因的啟動(dòng)子區(qū)域。
　　利用5個(gè)SNP位點(diǎn)的聯(lián)合基因型構(gòu)建雙螢光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒，與pRL-CMV共轉(zhuǎn)

3、染293T細(xì)胞，檢測其轉(zhuǎn)染后的啟動(dòng)子效率以TCAGA聯(lián)合型最高，TCAGA的啟動(dòng)效率較CTGGA高129％，CCAGA、CTAGA和CTGAT的啟動(dòng)效率較CTGGA分別低99％、73.2％和42.6％。TCAGA的啟動(dòng)子效率較CCAGA高756％，CCAGA比CTAGA低96.6％。
　　分析THRSP基因的表達(dá)水平與不同啟動(dòng)子效率呈顯著的相關(guān)性（P<0.05），并與瘦肉型豬群和脂肪型豬群這些SNP位點(diǎn)的基因頻率分布規(guī)律一致。可見