慢病毒介導(dǎo)的SNCG基因敲除對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：
　　研究慢病毒介導(dǎo)的SNCG基因敲除對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法：
　　復(fù)蘇已事先進(jìn)行SNCG敲除的實(shí)驗(yàn)組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組及空白對照的野生型SW1116細(xì)胞，并進(jìn)行傳代，培養(yǎng)到一定數(shù)量后，Real time PCR、Western blot檢測各組細(xì)胞的SNCG表達(dá)情況并進(jìn)行體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)足夠的SW1116細(xì)胞后，將獲得的腫瘤細(xì)胞液種植于裸

2、鼠脾被膜下，采用保脾法，建立人結(jié)腸癌裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。將21只裸鼠隨機(jī)分成三組，依次為RNAi組（目的基因敲除組）、NC組（空質(zhì)粒組）、CON組（空白對照組）。對三組裸鼠于脾下分別注射相同劑量干擾物質(zhì)（即SNCG-RNAi-SW1116，SNCG-NC-SW1116，SW1116）進(jìn)行干預(yù)，定期觀察裸鼠精神活動狀態(tài)、體重變化、脾臟原位成瘤大小變化，比較三組裸鼠的轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生部位及數(shù)量等。于注射后6周末處死裸鼠，解剖出脾臟原位腫瘤及轉(zhuǎn)移

3、瘤，做好各項(xiàng)指標(biāo)記錄，行HE染色觀察腫瘤組織病理改變，免疫組化染色、RT-PCR、Western blot檢測各組腫瘤標(biāo)本SNCG基因mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、Real time PCR及Western blot結(jié)果表明，靶向干擾SNCG基因表達(dá)的RNAi組細(xì)胞在SNCG mRNA及蛋白表達(dá)水平較NC組及CON組均明顯下降。
　　2、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與NC組及CON組相

4、比，RNAi組細(xì)胞SNCG基因的表達(dá)被抑制后，細(xì)胞的體外增殖、侵襲能力明顯下降。
　　3、成功構(gòu)建裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，實(shí)驗(yàn)中所成瘤體均經(jīng)HE染色得到證實(shí)。
　　4、與NC組及CON組相比，RNAi組裸鼠移植瘤生長緩慢甚至不生長，原位成瘤率及肝轉(zhuǎn)移率均明顯下降，所成瘤體在數(shù)量、體積方面亦明顯減小，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5、免疫組化、RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示，RNAi組腫瘤標(biāo)本與

5、其余兩組比較，SNCG mRNA和蛋白表達(dá)均明顯下降，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，慢病毒載體介導(dǎo)的SNCG基因沉默使SNCG表達(dá)降低，同時抑制了細(xì)胞增殖與侵襲能力。
　　2、成功建立裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。
　　3、裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型結(jié)果表明，SNCG基因沉默表達(dá)后可顯著降低裸鼠脾臟原位移植腫瘤及轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)量及體積。
　　4、在體內(nèi)，重組慢病毒質(zhì)粒LV-SNC