異丙酚對(duì)離體海馬神經(jīng)元存活及p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的影響.pdf

1、目的:探討不同濃度異丙酚對(duì)離體胎鼠海馬神經(jīng)元存活、凋亡及p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的影響。
　　方法:
　　1、體外培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元,7d時(shí)分別用NSE染色及Tubulin染色鑒定神經(jīng)元;
　　2、體外培養(yǎng)7d的神經(jīng)元,予不同濃度異丙酚單獨(dú)或聯(lián)合p38抑制劑(SB203580)干預(yù)24h,MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元存活情況;
　　3、體外培養(yǎng)7d的神經(jīng)元,予不同濃度異丙酚單獨(dú)或聯(lián)合SB203580干預(yù)24h,流

2、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡情況;
　　4、體外培養(yǎng)7d的神經(jīng)元,予不同濃度異丙酚干預(yù)30min,蛋白免疫印跡法半定量海馬神經(jīng)元p-p38MAPK及p38MAPK蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、NSE及Tubulin染色鑒定離體胎鼠海馬神經(jīng)元的陽(yáng)性率均大于90％。
　　2、MTT檢測(cè)結(jié)果顯示:單純的藥物溶劑(0.1%DMSO)或p38抑制劑SB203580對(duì)神經(jīng)元存活均無影響;與溶劑組比較,0.5μM及1μM異丙

3、酚組生存率升高(P<0.05),10、50、100、150及200μM異丙酚組生存率呈濃度依賴性降低(P<0.05或P<0.01);加入SB203580后,1μM異丙酚組生存率仍升高(P<0.05),10、100及200μM異丙酚組生存率呈濃度依賴性降低(P<0.05或P<0.01),100μM異丙酚+抑制劑組生存率高于100μM異丙酚組(P<0.01),200μM異丙酚+抑制劑組生存率高于200μM異丙酚組(P<0.01),余各濃度組

4、與相應(yīng)濃度加抑制劑組比較生存率則無明顯變化。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:與溶劑組比較,1μM異丙酚組凋亡率降低(P<0.05),10、100及200μM異丙酚組凋亡率呈濃度依賴性升高(P<0.05或P<0.01);200μM異丙酚+抑制劑組凋亡率明顯低于200μM異丙酚組(P<0.01),但仍高于溶劑組(P<0.01)。
　　4、Western blot結(jié)果顯示:200μM異丙酚作用30min時(shí)p38MAPK的磷酸化達(dá)到高

5、峰(P<0.01);濃度相關(guān)性上,與溶劑組比較,10、100及200μM異丙酚組p38MAPK磷酸化水平呈濃度依賴性升高(P<0.05或P<0.01),低濃度組則無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1、異丙酚對(duì)胎鼠離體海馬神經(jīng)元生存及凋亡的影響呈雙向作用,亞臨床濃度異丙酚能夠?qū)购ｑR神經(jīng)元凋亡,提高細(xì)胞存活率,高濃度異丙酚則劑量依賴性地促進(jìn)海馬神經(jīng)元凋亡,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
　　2、高濃度異丙酚可通過激活p38MAPK的磷酸化,