氧化苦參堿體外抗乙型肝炎病毒作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、本研究分為二個(gè)部分：一、氧化苦參堿與阿德福韋酯體外抑制乙肝病毒復(fù)制的比較研究；二、氧化苦參堿體外對(duì)乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的影響。 一、氧化苦參堿與阿德福韋酯體外抑制乙肝病毒復(fù)制的比較研究。 目的：觀察氧化苦參堿和阿德福韋酯抑制乙肝病毒復(fù)制作用效果。 方法：將8x10<'4>/ml的HepG 2.2.15細(xì)胞分別接種于24孔板中，每孔800μl。接種后48小時(shí)加入含不同藥物濃度的培養(yǎng)液，氧化苦參堿的作用濃度分

2、別為1000μg/ml、500μg/ml和250μg/ml，阿德福韋酯的作用濃度分別為20μg/ml、10μg/ml和5μg/ml，并設(shè)立不加藥的空白對(duì)照組，每組5個(gè)復(fù)孔。在加藥后48小時(shí)和96小時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，分別對(duì)上清中HBV DNA、HBsAg、HBeAg進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算兩種藥物對(duì)HBV DNA、HBsAg、HBeAg的抑制率。 結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，1000μg/ml的氧化苦參堿和阿德福韋酯20μg/ml對(duì)HBV

3、 DNA、HBsAg、HBeAg的抑制率最高。加藥后48小時(shí)1000μg/ml的氧化苦參堿對(duì)HBVDNA、HBsAg、HBeAg抑制率分別為24.28％、29.85％、18.48％，20μg/ml阿德福韋酯的抑制率分別為23.80％、34.50％、19.74％；加藥后96小時(shí)1000μg/ml氧化苦參堿的抑制率分別為29.06％、43.32％、25.13％，20μg/ml阿德福韋酯的抑制率分別為32.98％、47.65％、25.40％。

4、 結(jié)論：氧化苦參堿在體外對(duì)乙肝病毒有抑制作用，1000μg/ml的氧化苦參堿與 20μg/ml阿德福韋酯對(duì)HBV的抑制效果相似。 二、氧化苦參堿對(duì)乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的影響。 目的：觀察氧化苦參堿抑制乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的作用，探討其抗乙型肝炎病毒作用的可能機(jī)制。 方法：從HepG 2.2.15細(xì)胞上清中獲取乙型肝炎病毒顆粒，以包括p<'32>-dCTP在內(nèi)的脫氧核酸作為底物，加入不同藥物

5、濃度的反應(yīng)液，氧化苦參堿的濃度分別為1000μg/ml、800μg/ml、600μg/ml、400μg/ml、200μg/ml，阿德福韋酯的藥物濃度分別為100μg/ml、80μg/l、60μg/ml、40μg/ml、20μg/ml，并設(shè)立空白對(duì)照組，每組3個(gè)復(fù)管。于37℃孵育過(guò)夜，蛋白酶K消化后每管取35μl點(diǎn)樣于DE 81濾膜上，液體閃爍測(cè)量?jī)x測(cè)量摻入HBVDNA正鏈中的<'32>P-dCTP的放射量。 結(jié)果：與空白對(duì)照組相