苦蕎離體再生體系的建立和遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本文試圖通過基因工程技術(shù)來提高苦蕎的耐鹽性，期望獲得優(yōu)良抗逆新品系，這對我國苦蕎種植業(yè)的發(fā)展有重要的意義。 以苦蕎的子葉和下胚軸為外植體研究了苦蕎植株再生的胚狀體發(fā)生途徑和器官發(fā)生途徑，建立起苦蕎的高頻再生體系。試驗結(jié)果表明來自下胚軸的胚性愈傷組織在附加2.0 mg·L<'-1> BA、0.5 mg·L<'-1> KT、0.1 mg·L<'-1> NAA的1/2MS培養(yǎng)基上芽的誘導(dǎo)率最高達(dá)到76％，來源于子葉的胚性愈傷組織在附加

2、1.0 mg·L<'-1>BA、0.1 mg·L<'-1> KT、0.1 mg·L<'-1> NAA的1/2MS培養(yǎng)基上下芽的誘導(dǎo)率也達(dá)到71％。MS+1 mg·L<'-1>NAA是適宜的再生苗生根培養(yǎng)基。 在建立苦蕎胚狀體發(fā)生途徑再生體系的基礎(chǔ)上，采用攜帶擬南芥AtNHX1基因的根癌農(nóng)桿菌LBA4404菌株轉(zhuǎn)化苦蕎子葉和下胚軸，最終獲得了具有卡那霉素抗性的愈傷組織，并分化形成了轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)PCR、RT-PCR和Souther

3、n檢測證實AtNHX1基因已成功地整合到苦蕎基因組中。對轉(zhuǎn)基因愈傷組織及其再生植株進(jìn)行NaCl脅迫試驗，發(fā)現(xiàn)在不同的鹽濃度下轉(zhuǎn)基因愈傷組織和再生植株的生長狀態(tài)均明顯優(yōu)于未轉(zhuǎn)化的對照組，轉(zhuǎn)化的愈傷組織在NaCl濃度為1.5％時愈傷組織仍能存活。轉(zhuǎn)化植株在1％NaCl脅迫時植株生長狀況明顯優(yōu)于未轉(zhuǎn)化植株，表明AtNHX1基因?qū)牒蟠_實可以提高苦蕎組織的耐鹽性。 高效液相層析實驗結(jié)果顯示在愈傷組織形成過程中蘆丁含量會明顯下降，子葉愈傷