木果楝種子的化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究.pdf

1、紅樹林植物木果楝（Xylocarpus granatum Koenig）廣泛分布于印度洋及東南亞沿海，屬于楝科（Meliaceae）木果楝屬（Xylocarpus）植物。長期以來印度人一直使用木果楝來治療瘧疾等一些發(fā)熱性疾病，在東南亞的一些國家也常將其作為民間藥物用于治療腹瀉、霍亂和瘧疾等發(fā)熱性疾病，同時(shí)也被作為昆蟲拒食素應(yīng)用。木果楝屬全世界范圍內(nèi)僅包含3種植物，分別為Xvlocarpus granatum（木果楝），Xylocarpu

2、s moluccensis和Xylocarpus rumphii，主要分布于亞洲和非洲的熱帶海岸及大洋洲北部，我國境內(nèi)只有木果楝這1種，分布于海南沿海。關(guān)于木果楝屬的實(shí)驗(yàn)室研究主要集中在木果楝（X.granatum）和X.moluccensis兩種植物上，其中關(guān)于種子和果實(shí)研究的最多。
　　 到目前為止從木果楝屬中分離得到的化合物有100余個(gè)，包括檸檬苦素類化合物、有機(jī)酸類化合物、生物堿類化合物、甾醇類化合物、黃烷醇類化合物和單

3、萜類化合物等，其中以檸檬苦素類化合物為主。檸檬苦素類化合物屬于楝烷型四降三萜，是一系列C17含有一個(gè)呋喃環(huán)取代的高度氧化的結(jié)構(gòu)單元為基本母體的化合物的總稱。該類化合物自上個(gè)世紀(jì)七八十年代起被廣泛研究，并被認(rèn)為是具有高度生物活性的天然物質(zhì)，藥理實(shí)驗(yàn)顯示具有抑菌、殺蟲、抑制HIV、和抗腫瘤的活性[3-5]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，該類化合物具有抑制由化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)的肝癌、腸癌、口腔癌和皮膚癌等作用，且對(duì)動(dòng)物模型無毒性[6-8]。本研究主要針對(duì)木果楝種子

4、的化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，并對(duì)分離得到的部分單體化合物進(jìn)行了抗腫瘤細(xì)胞HLE、KT及HeLa增殖作用的篩選。
　　 目的：本研究以中國紅樹林植物木果楝種子為研究對(duì)象，利用各種提取分離純化的手段和技術(shù)，建立行之有效的單體化合物分離方法。應(yīng)用UV、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY、MS等現(xiàn)代化結(jié)構(gòu)分析方法完成分子的平面結(jié)構(gòu)和立體結(jié)構(gòu)的確定。同時(shí)對(duì)已得到的部分化學(xué)成分進(jìn)行初步的抗

5、腫瘤活性篩選，以期得到新的具有抗癌活性的藥物前體。
　　 方法：將自然干燥的木果楝種子（6.4kg）粉碎，室溫下用95％乙醇（30.0L）浸泡三天，重復(fù)四次。將所得浸出液濾出合并后減壓濃縮至膏狀，室溫下放置30天揮干剩余的乙醇，即得到木果楝種子粗提物浸膏（2598.5g）。將浸膏分散于適量水中，依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得到相應(yīng)萃取物，分別為35.7g、158.1g、36.1g。三部分萃取浸膏分別通過

6、反復(fù)的硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠色譜、制備型薄層色譜、制備型高效液相色譜、結(jié)晶與重結(jié)晶等操作之后，從石油醚部分得到化合物1和2；二氯甲烷部分分離得到化合物1～25；乙酸乙酯部分分離得到化合物1、9、25。
　　 應(yīng)用UV、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY、MS等波譜技術(shù)完成化合物的平面結(jié)構(gòu)和立體結(jié)構(gòu)的確認(rèn)。
　　 運(yùn)用MTT法對(duì)分離得到的部分單體化合物進(jìn)行了抗腫瘤細(xì)胞HLE、

7、KT及HeLa增殖作用的研究，以期得到新的抗腫瘤前體化合物。
　　 結(jié)果：通過系統(tǒng)提取分離，從木果楝種子中共得到25個(gè)單體化合物，通過結(jié)構(gòu)鑒定確定了其中21個(gè)的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其余4個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)還在解析中。鑒定結(jié)果：其中11個(gè)檸檬苦素類化合物，8個(gè)前檸檬苦素類化合物，2個(gè)甾醇類化合物。被確定的21個(gè)化合物分別為β-谷甾醇（1），胡蘿卜苷（2），odoratone（3），xyloccensin K（4），piscidinol G（5）

8、，xylocarpin H（6），xylomexicanin A（7），7-deacetyl-7-oxogedunin（8），xylogranatin C（9），xylogranatin D（10），3β-detigloyoxy-2'-methylbutanoyloxy xylogranatin B（11），hispidol B（15），spicatin（17），proceranolide（18），xylogranatin A（19），

9、xylocarpin G（20），3-hydroxydihydrocarapin（21），grandifoliolenone（22），sapelin E Acetate（23），holstinone C（24），holstinone B（25）。
　　 對(duì)7個(gè)化合物的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性研究表明，有3個(gè)化合物對(duì)人腫瘤細(xì)胞株HLE、Hela、KT顯示了不同程度的抑制活性。
　　 結(jié)論：本研究對(duì)木果楝種子的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的

10、提取、分離、結(jié)構(gòu)鑒定及抗腫瘤活性初步篩選。采用95％乙醇冷浸提??；應(yīng)用各種色譜方法（如：硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜、制備型薄層色譜、制備液相色譜等），結(jié)晶、重結(jié)晶等多種分離純化手段，提取分離方法選擇較恰當(dāng)，共分離得到25個(gè)單體化合物，通過廣泛的波譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確定了其中21個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中化合物21為新化合物，22-25為首次從木果楝屬植物中分離得到。有3個(gè)化合物對(duì)人腫瘤細(xì)胞株HLE、Hela、KT顯示了不同程度的抑制