豬傳染性胃腸炎與豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗的研制及免疫原性評價.pdf

1、豬傳染性胃腸炎(TGE)和豬流行性腹瀉(PED)是分別由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的消化道傳染性疾病，具有急性、高接觸性的特點。TGE和PED的臨床癥狀都表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、脫水等，均可導(dǎo)致仔豬死亡和成年感染豬機(jī)體消瘦、降低飼料效率、增加養(yǎng)殖成本，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，疫苗接種是控制這兩種疾病的有效方法。研制針對性強的流行毒株的疫苗對于控制兩種疾病具有現(xiàn)實意義。為此，本試驗用TGEVA/E

2、毒株和PEDV A/D毒株，初步研制了豬傳染性胃腸炎與豬流行系腹瀉二聯(lián)滅活疫苗，并對其免疫效果進(jìn)行了初步研究。
　　為研究TGEV A/E毒株在P K-15細(xì)胞上的增殖動態(tài)，將TGEV接種到PK-15細(xì)胞上，分別在接毒后的0h、8h、16h、24h、32h、40h、48h、56h、64h、72h、80h收取細(xì)胞液和上清液，每檢測點設(shè)3個平行對照，通過測定不同時間病毒的TCID50，整理數(shù)據(jù)后繪制TGEV在 PK-15細(xì)胞上的增殖曲

3、線。結(jié)果表明，TGEV接種到 P K-15上后，48h時達(dá)到增殖高峰（TCID50為10-6.83/mL），后可持續(xù)到接毒后56h，病毒的TCID50可達(dá)到10-6.5/mL以上。表明在PK-15上增殖的TGEV可在48-64h時間收獲病毒。
　　利用TGEV A/E毒株和PEDV A/D毒株作為制備二聯(lián)滅活苗的疫苗株，分別在PK-15細(xì)胞和VE RO細(xì)胞上進(jìn)行傳代培養(yǎng)，擴(kuò)增出高滴度的病毒液，制備成二聯(lián)油乳劑滅活疫苗，并添加原核表

4、達(dá)的PED V流行毒株S基因前1077個堿基表達(dá)的蛋白S A，進(jìn)行疫苗的物理性狀、無菌檢驗和安全檢驗和動物免疫試驗，分別通過微量血清中和試驗和 ELI S A試驗檢測免疫后仔豬體內(nèi)的抗體水平并采用spss l7.0統(tǒng)計學(xué)軟件對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示：該疫苗物理性狀等檢驗均合格；對小鼠和豬安全無副作用；將TGE-PED二聯(lián)滅活苗分高、中、低劑量免疫豬后發(fā)現(xiàn)高、中劑量組之間抗體水平接近，兩組數(shù)據(jù)均明顯高于低劑量組且差異顯著（P

5、<0.05），確定該二聯(lián)苗最佳免疫劑量為2mL/頭；TGEV抗體在二免四周時抗體水平達(dá)到最高，中和抗體檢測結(jié)果和ELISA抗體檢測結(jié)果分別為1:319和1：1280，PEDV抗體在二免三周時抗體水平達(dá)到最高，中和抗體檢測結(jié)果和 ELISA抗體檢測結(jié)果分別可高達(dá)1:512和1：1600，分別與相對應(yīng)的TGEV（1:319和1:1280）及PEDV（1:512和1:1600）單苗的抗體水平相當(dāng)，差異不顯著（P>0.05），但均高于商品苗的抗