阿司匹林與脂多糖對(duì)大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的作用.pdf

1、本文的目的在于：觀察腦缺血再灌注（CIRP）后小膠質(zhì)細(xì)胞活化及MMP-3、OPN表達(dá)的規(guī)律；觀察細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖(LPS)對(duì)大鼠腦小膠質(zhì)細(xì)胞活化及腦缺血再灌注損傷的影響；研究阿司匹林（ASA）對(duì)CIRP炎癥反應(yīng)的作用，探討ASA的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)建立了3種動(dòng)物模型，即大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型(CIRP模型)、大鼠LPS腹腔注射模型(LPS模型)和CIRP+LPS腹腔注射模型(CIRP+LPS模型)。以80mg/k

2、g劑量的ASA、1mg或2.5mg/kg劑量的LPS作為干預(yù)因素。采用大鼠24h死亡率、TTC染色法測(cè)定腦損傷范圍和大鼠橫木行走試驗(yàn)評(píng)價(jià)不同組別大鼠的腦損傷程度。采用免疫組化和免疫熒光的方法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和MMP-3、OPN的表達(dá)。 結(jié)果：1.CIRP模型(1)腦損傷程度：與對(duì)照組相比，ASA能明顯降低大鼠死亡率(P＜0.05)，縮小腦損傷范圍(P＜0.01)，提高大鼠橫木行走試驗(yàn)的評(píng)分(P＜0.01)。 (2)小膠

3、質(zhì)細(xì)胞的活化：CIRP后小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量隨時(shí)間、缺血區(qū)部位不同而變化。在梗死周圍區(qū)，6h即觀察到較多數(shù)量的小膠質(zhì)細(xì)胞，24h達(dá)高峰，持續(xù)至7d，細(xì)胞形態(tài)可為高分枝樣、桿狀、圓形和阿米巴樣。在梗死中心區(qū)，24h小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量開(kāi)始增多，7d時(shí)達(dá)高峰，并可見(jiàn)大量的泡沫細(xì)胞。ASA干預(yù)后，小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，以梗死周圍區(qū)24h時(shí)為著(P＜0.01)。 (3)OPN的表達(dá)：OPN陽(yáng)性細(xì)胞主要為小膠質(zhì)細(xì)胞；CIRP后6h，OP

4、N陽(yáng)性細(xì)胞局限在梗死周圍區(qū)，細(xì)胞數(shù)量少，24h達(dá)高峰，持續(xù)至7d；24h梗死中心區(qū)也開(kāi)始出現(xiàn)OPN陽(yáng)性細(xì)胞，7d時(shí)達(dá)高峰，并可見(jiàn)氣球樣細(xì)胞。ASA干預(yù)后，OPN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組略有減少，但是沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)，而OPN陽(yáng)性細(xì)胞占小膠質(zhì)細(xì)胞的比率明顯增高(P＜0.01)。 (4)MMP-3的表達(dá)：從CIRP后6小時(shí)開(kāi)始，缺血區(qū)內(nèi)出現(xiàn)MMP-3陽(yáng)性細(xì)胞，24h～3d時(shí)最為明顯，7d時(shí)仍有表達(dá)，這些細(xì)胞主要為缺血神經(jīng)元；

5、CIRP后3d起，在梗死周圍區(qū)出現(xiàn)較多的MMP-3陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞，7d時(shí)最多。ASA干預(yù)后，梗死周圍區(qū)MMP-3陽(yáng)性神經(jīng)元明顯減少，以3d～7d時(shí)最為顯著(P＜0.05)。 2.LPS模型：LPS(2.5mg/kg)腹腔注射大鼠，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞遍布整個(gè)腦組織；24h達(dá)高峰，表現(xiàn)為完全活化的圓形小膠質(zhì)細(xì)胞；7d時(shí)，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞基本消失。ASA干預(yù)后，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)均明顯低于LPS組(P＜0.05)，以24h為著

6、(P＜0.01)；并且持續(xù)時(shí)間短，5h基本消失殆盡。 3.CIRP+LPS模型(1)腦損傷程度：CIRP后腹腔注射LPS(1mg/kg)，增加大鼠死亡率(P＜0.05)，擴(kuò)大腦損傷范圍(P＜0.01)，降低大鼠橫木行走試驗(yàn)的評(píng)分(P＜0.01)。ASA干預(yù)后，大鼠腦損傷程度回復(fù)至對(duì)照組水平。 (2)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化：CIRP后腹腔注射LPS大鼠，不論腦梗死核心區(qū)還是周圍區(qū)，小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量及免疫反應(yīng)強(qiáng)度都較對(duì)照組有顯著差

7、異(P＜0.05)。ASA干預(yù)后，小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯低于LPS組，而其數(shù)量和形態(tài)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。 (3)MMP-3的表達(dá)：CIRP后腹腔注射LPS大鼠，MMP-3陽(yáng)性神經(jīng)元及小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量均較對(duì)照組顯著增多(P＜0.05)。ASA干預(yù)后，MMP-3的表達(dá)顯著低于LPS組(P＜0.05)，而與對(duì)照組相似。 結(jié)論：1.CIRP后小膠質(zhì)細(xì)胞迅速激活，其細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量隨時(shí)間及缺血區(qū)域不同有著明顯的規(guī)律。小膠質(zhì)細(xì)胞激活

8、可能繼發(fā)于早期神經(jīng)元的損傷并且進(jìn)一步加重缺血性腦損傷。 2.CIRP后MMP-3表達(dá)明顯增高，其可能通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)、破壞血腦屏障，加重缺血性腦損傷。 3.CIRP后OPN表達(dá)明顯上調(diào)，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞是OPN的主要來(lái)源，OPN可能參與缺血性腦損傷后基質(zhì)重建和組織修復(fù)過(guò)程。 4.CIRP后腹腔注射LPS，可增加大鼠24h死亡率及腦梗死體積，加重大鼠神經(jīng)功能缺損。這可能是由于LPS通過(guò)上調(diào)MMP-3表達(dá)，激活小膠

9、質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)CIRP后炎癥反應(yīng)，加重繼發(fā)性腦損傷的結(jié)果。 5.80mg/kg劑量的ASA對(duì)大鼠CIRP損傷有明顯保護(hù)作用，可以降低大鼠24h死亡率，縮小腦梗死體積，改善神經(jīng)功能缺損，促進(jìn)肢體恢復(fù)。而且ASA可以逆轉(zhuǎn)LPS導(dǎo)致的繼發(fā)性腦損傷。 6.ASA可抑制CIRP損傷過(guò)程中的炎癥反應(yīng)，其機(jī)制可能與抑制CIRP早期小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和MMP-3的表達(dá)有關(guān)；另外，ASA還有可能通過(guò)上調(diào)OPN的表達(dá)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。