ZHX2基因啟動子甲基化在肝細胞癌中的研究.pdf

1、中山大學博士學位論文ZHX2基因啟動子甲基化在肝細胞癌中的研究姓名：呂自力申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：文劍明20060501ZHX2基因啟動子甲基化在肝細胞癌中的研究劑使甲基化的腫瘤抑制基因去甲基化，重新發(fā)揮抑制腫瘤的功能，就有可能成為一種新的腫瘤治療途徑。常見的甲基化抑制劑是胞苷類似物如5雜氮2脫氧胞苷(5Aza2deoxycytidine，5Azadc)，其作用機制是與DNA甲基轉移酶(DNAmethyltr

2、ansferase，DNMT)共價結合，降低酶的生物活性。許多研究者成功地將5Azadc運用在多個體外培養(yǎng)的腫瘤細胞株中，逆轉了多個腫瘤抑制基因啟動子的甲基化狀態(tài)，使不同的腫瘤抑制基因得以開放，進而有效地抑制了腫瘤的發(fā)展。目前用于DNA甲基化檢測的方法很多，有高效液相色譜法(Highperformanceliquidchromatography，HPLC)、甲基化特異性PCR(methylationspecificPCR，MSP)、基因

3、測序、甲基化敏感性內(nèi)切酶指紋法(MethylationSensitiveRestrictionFingerprinting，MSRF)和細胞去甲基化培養(yǎng)等方法。這些方法分別能研究單一基因的甲基化及篩選腫瘤相關的異常甲基化基因。本文的目的在于篩選HCC相關的異常甲基化基因，并研究該基因異常甲基化在HCC發(fā)生情況，再通過探討啟動子甲基化對基因表達的影響進而分析腫瘤抑制基因靜息的機制，為闡明HCC的發(fā)生、發(fā)展機制提供研究基礎。全文共分為四個部

4、分：一、運用MSRF技術篩選肝細胞癌中異常甲基化基因收集32例新鮮HCC組織，包括腫瘤組織及瘤旁5cm以外的肝組織，并收集6例血管瘤或膽管結石旁正常肝組織，提取組織DNA，經(jīng)過甲基化非敏感性內(nèi)切酶MseI單獨消化或MseI和甲基化敏感的內(nèi)切酶BstUI聯(lián)合消化DNA，產(chǎn)物分別經(jīng)過2對隨機引物(Bsl／18，Bsl2／13)PCR擴增，電泳顯示HCC癌組織與癌旁肝組織及正常肝組織相比有3條異常甲基化片段，長度分別為200bp、210bp及

5、300bp左右。其中200bp異常甲基化片段出現(xiàn)于3例病例中，210bp及300bp異常甲基化出現(xiàn)于另外2例病例中。通過回收該異常甲基化片段，與T載體連接，轉化感受態(tài)大腸桿菌DH5Ci，選取陽性克隆測序，將獲取的序列與人類基因文庫進行類比分析，發(fā)現(xiàn)這3條異常甲基化片段分別與ZHX2(Zincfingersandhomeoboxesprotein2)、MEF2C(myocyteenhancerfactor2C，MADSboxtranscr