褐飛虱kr-h1基因的克隆及其功能研究.pdf

1、保幼激素(Juvenile hormone,JH)是由咽側(cè)體分泌的,在昆蟲發(fā)育、變態(tài)和生殖過程中起重要作用的激素。目前對(duì)JH信號(hào)傳導(dǎo)途徑的作用機(jī)理還不十分清楚?，F(xiàn)有研究表明kr-h1(Kruppel homolog-1)是一種含C2H2鋅指結(jié)構(gòu)的保幼激素轉(zhuǎn)錄因子,處于保幼激素受體Met下游。目前研究發(fā)現(xiàn)kr-h1具有調(diào)控幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育和變態(tài)發(fā)育的功能,也與蜜蜂的覓食行為和果蠅幼體神經(jīng)細(xì)胞的形成有關(guān)。
　　本研究通過cDNA末端快速擴(kuò)

2、增(RACE)技術(shù)克隆獲得褐飛虱的kr-h1全長(zhǎng)基因,翻譯成氨基酸個(gè)數(shù)為611,其中保守區(qū)域是8個(gè)C2H2結(jié)構(gòu)的鋅指。利用熒光定量 PCR技術(shù)( Realtime fluores-cence Quantitative PCR,qPCR)檢測(cè)在褐飛虱不同齡期、不同組織中 kr-h1的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)kr-h1在褐飛虱胚胎發(fā)育、若蟲生長(zhǎng)及成蟲期均有表達(dá),尤其在早期發(fā)育階段表達(dá)非常活躍,并且在腦和胸部等不同組織中均能檢測(cè)到該基因的表達(dá),此外

3、kr-h1對(duì)外源保幼激素及其類似物較為敏感,尤其在齡期轉(zhuǎn)變的分界點(diǎn)處表達(dá)量變化非常明顯。通過RNA干擾技術(shù)將褐飛虱kr-h1沉默,發(fā)現(xiàn)kr-h1基因干擾顯著影響了褐飛虱翅膀和外生殖器的發(fā)育。此外,通過RNA-seq技術(shù)分析kr-h1突變體褐飛虱中可能與kr-h1基因功能相關(guān)基因的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)表皮蛋白基因( Insect cuticular protein genes, ICPG)表達(dá)升高,kr-h1對(duì)ICPG起到負(fù)調(diào)控作用。