養(yǎng)殖刺參（Apostichopus japonicus）腐皮綜合癥的發(fā)生與異養(yǎng)菌區(qū)系間的關(guān)系.pdf

1、隨著北方沿海刺參(Apostichops japonicus)養(yǎng)殖的興起和養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大，在刺參越冬保苗和養(yǎng)成階段普遍發(fā)生腐皮綜合癥疾病，導(dǎo)致極高死亡率和嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。該病主要癥狀表現(xiàn)為：腫嘴、搖頭、排臟、身體萎縮、體表潰爛，解體死亡；其傳染性強(qiáng)、發(fā)病快、流行性廣，嚴(yán)重制約了刺參的健康養(yǎng)殖和可持續(xù)發(fā)展。 目前，關(guān)于養(yǎng)殖刺參病害的研究主要集中在疾病的流行病學(xué)、病原學(xué)以及組織病理學(xué)等，而疾病的發(fā)生機(jī)理特別是疾病發(fā)生的環(huán)境微生態(tài)學(xué)

2、特征則未曾見到報(bào)道。為了掌握刺參腐皮綜合癥發(fā)生早期水體的水質(zhì)狀況、揭示發(fā)病早期病原菌與養(yǎng)殖環(huán)境中異養(yǎng)菌區(qū)系問的關(guān)系，闡明刺參腐皮綜合癥發(fā)生的根源，本文在對(duì)青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)跟蹤的基礎(chǔ)上，首次報(bào)道了養(yǎng)殖刺參在低溫養(yǎng)殖期間以及渡夏期間刺參腐皮綜合癥發(fā)生早期養(yǎng)殖水體水質(zhì)、池塘中細(xì)菌數(shù)量與分布特征以及池塘水體、底泥、刺參腸道中優(yōu)勢(shì)菌與刺參病灶組織優(yōu)勢(shì)菌之間的相關(guān)性，并對(duì)該病原進(jìn)行了鑒定。 2006年1月～5月刺參

3、低溫養(yǎng)殖期間，在青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場(chǎng)刺參腐皮綜合癥發(fā)生的早期，對(duì)正常及發(fā)病池塘的水質(zhì)、池塘中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)的數(shù)量與分布以及刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)進(jìn)行了研究。同時(shí)，比較分析了發(fā)病早期發(fā)病池塘水體、表層底泥、刺參腸道中優(yōu)勢(shì)菌與刺參病灶組織優(yōu)勢(shì)菌之間的相關(guān)性。此外，對(duì)刺參病灶組織分離的優(yōu)勢(shì)菌060102A、060330B進(jìn)行了人工感染試驗(yàn)證實(shí)其為刺參腐皮綜合癥的致病原并進(jìn)行了分類鑒定。水質(zhì)監(jiān)測(cè)內(nèi)容包括：溫度(T)、鹽度

4、(S)、pH、溶解氧(DO)、化學(xué)需氧量(COD)、氨氮(NH<,4><'+>-N)和亞硝酸氮(NO<,2><'->-N)。結(jié)果表明：發(fā)病池塘水體水溫和溶氧形成分層，底層水體逐漸惡化；底層水體異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)普遍高于表層，但整個(gè)池水細(xì)菌數(shù)量相對(duì)較低；池塘表層底泥與刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)較大，弧菌總數(shù)較低，其優(yōu)勢(shì)菌落與刺參病灶組織分離的優(yōu)勢(shì)菌具有一致性，與水體中優(yōu)勢(shì)菌相關(guān)不大。通過形態(tài)學(xué)觀察、API半自動(dòng)化鑒定、常規(guī)生理生化試驗(yàn)以及16

5、S rRNA基因序列同源性分析等表明，060102A為假交替單胞菌屬細(xì)(Pseudoalteromonas sp.)：060330B具有假單胞菌屬的特征，其表型特征與惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)相似，親緣關(guān)系與惡臭假單胞菌最近，相似率達(dá)到99.5％。菌株060330B被鑒定為惡臭假單胞菌，并視為養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的致病原之一。通過對(duì)多起不同來源患病刺參的調(diào)查研究表明，使用年限長(zhǎng)、淤泥層厚呈黑色并伴有異味的養(yǎng)殖池塘

6、在該時(shí)期容易導(dǎo)斂刺參腐皮綜合癥的發(fā)生，刺參腐皮綜合癥的發(fā)生與池塘水體分層引起的水質(zhì)惡化和底泥中病原菌數(shù)量密切相關(guān)。 2006年7月～10月養(yǎng)殖刺參渡夏期間，在青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場(chǎng)刺參腐皮綜合癥發(fā)生的早期，對(duì)發(fā)病池塘的水質(zhì)、池塘中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)的數(shù)量與分布以及刺參腸道中的異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)進(jìn)行了研究。同時(shí)，比較分析了發(fā)病早期池塘水體、表層底泥、刺參腸道中優(yōu)勢(shì)菌與刺參病灶組織優(yōu)勢(shì)菌之間的相關(guān)性。此外，對(duì)刺參病灶組織分離的優(yōu)

7、勢(shì)菌060904E進(jìn)行了人工感染試驗(yàn)證實(shí)其為刺參腐皮綜合癥的致病原并進(jìn)行了分類鑒定。水質(zhì)監(jiān)測(cè)內(nèi)容包括：溫度(T)、鹽度(S)、pH、溶解氧(DO)、化學(xué)需氧量(COD)、氨氮(NH<,4><'+>-N)和亞硝酸氮(NO<,2><'->-N)。結(jié)果表明：整個(gè)養(yǎng)殖池塘水體出現(xiàn)了不同程度惡化，水體中異養(yǎng)菌總數(shù)與弧菌總數(shù)平均分別達(dá)到3.3×10<'4>cfu/mL、2.0×10<'4>cfu/mL，水層差異不大；池塘表層底泥中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總

8、數(shù)平均分別為5.9×10<'6>cfu/g、1.4×10<'6>cfu/g，弧菌數(shù)量處于較高水平；刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)平均分別為5.8×10<'6>cfu/g、1.9×10<'6>cfu/g，弧菌數(shù)量也處于較高水平；池塘水體、底泥以及刺參腸道中分離出的優(yōu)勢(shì)菌與刺參病灶組織分離的優(yōu)勢(shì)菌具有一致性。細(xì)菌鑒定結(jié)果表明菌株060904E為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)，哈維氏弧菌被視為渡夏期間養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的致病原。刺

9、參腐皮綜合癥的發(fā)生與養(yǎng)殖池塘的水質(zhì)惡化和池塘水體和底泥中致病性弧菌數(shù)量密切相關(guān)。 本文研究表明，惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)和哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是青島地區(qū)養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的重要致病原，這為豐富養(yǎng)殖刺參的病原學(xué)研究奠定了理論基礎(chǔ)。同時(shí)本文揭示了池塘養(yǎng)殖條件下，刺參腐皮綜合癥的發(fā)生與池塘水體的惡化及底泥中病原菌數(shù)量密切相關(guān)，對(duì)刺參養(yǎng)殖中的健康管養(yǎng)殖刺參(Apostichopus ja