肟類化合物水解碘化乙酰硫代膽堿及對(duì)乙酰膽堿酯酶恢復(fù)作用研究.pdf

1、本文系統(tǒng)研究了：1)三種肟類化合物(氯解磷定(Pralidoxime Chloride，2-PAM-C1)，雙磷定(Trimedoxime，TMB<,4>)和雙復(fù)磷(Obidoxime Chloride，LH<,6>))的非經(jīng)典功能一水解乙酰膽堿(碘化乙酰硫代膽堿(acetylthiocholine iodide，ATCh)和碘化乙酰膽堿(acetvlcholine iodide))；2)三種肟類化合物(2-PAM-C1，TMB

2、<,4>和LH<,6>)的經(jīng)典功能一對(duì)中毒乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的恢復(fù)作用；3)中毒AChE的恢復(fù)和老化性質(zhì)。結(jié)果表明： 1.三種肟類化合物的非經(jīng)典功能-水解乙酰膽堿能力比較 (1)三種肟類化合物均能明顯的水解ATCh，并且水解能力隨著溫度，pH值和反應(yīng)時(shí)間的升高而增強(qiáng)。以肟類化合物TMB<,4>水浴孵溫30℃條件為例：隨著pH值由7.0到8.0，反應(yīng)2 h后的OD<,

3、412>也分別0.90和2.08。同樣當(dāng)反應(yīng)溫度的升高水解能力增強(qiáng)。例如反應(yīng)溫度為5℃，15℃，30℃，37℃和40℃，反應(yīng)2 h后的OD<,412>也分別為0.028，0.29，0.99，0.94和1.067。 (2)當(dāng)pH≤6.2時(shí)，三種肟類化合物對(duì)ATCh僅有微弱水解，并且隨著溫度和pH值的增加水解的增幅也較小。水解能力較強(qiáng)的TMB<,4>在水浴孵溫37℃反應(yīng)4h時(shí)的OD<,412>也僅為0.29，LH<,6>的僅

4、為0.20；相反當(dāng)pH≥7.0時(shí)，三種肟類化合物對(duì)ATCh水解明顯，并且隨著溫度和pH值的增加水解的增幅也較大。 (3)三種肟類化合物對(duì)ATCh的水解能力隨著肟類化合物終濃度的升高而增強(qiáng)。如pH為7.0，ATCh終濃度為0.6 mmol/L，反應(yīng)溫度為30℃， 當(dāng)2-PAM-CI終濃度依次為0.001，0.01，0.05，0.1，0.2和0-5 mmol/L時(shí)，反應(yīng)20 min后的OD412分別0.0013，0.0057，0.

5、0387，0.1037，0.2313和0.6083。 (4)三種肟類化合物對(duì)ATCh的水解能力隨著ATCh濃度的升高而增強(qiáng)。如pH為7.0，2-PAM-C1終濃度為0.05mmol/L，反應(yīng)溫度為30℃，當(dāng)ATCh終濃度依次為0.006，0.06，0.12和0.6 mmol/L時(shí)，反應(yīng)20 min后的OD<,412>也分別0.00，0.0023，0.0100和0.0670。 (5)以上的實(shí)驗(yàn)均采用微量DTNB顯色法測(cè)定三

6、種肟類化合物對(duì)ATCh的水解能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示在相同條件下TMB<,4>和LH<,6>的水解能力比2-PAM-Cl強(qiáng)。如2-PAM-C1，TMB<,4>和LH<,6>在pH為7.0，溫度30℃反應(yīng)4 h后的OD<,412>分別為0.2715，1.4487和1.436。 (6)利用Michel法比較研究了三種肟類化合物在pH為8.0的巴比妥鈉一KH<,2>PO<,4>-NaCl緩沖液中對(duì)碘化乙酰硫代膽堿(acet

7、ylthiocholine iodide，ATCh)和碘化乙酰膽堿(acetylcholine iodide)的水解能力。結(jié)果顯示：三種肟類化合物均能夠水解ATCh，但均不能水解碘化乙酰膽堿；在相同條件下2-PAM-C1的水解能力比TMB<,4>和LOH<,6>強(qiáng)。在水浴孵溫25℃ 2-PAM-C1、TMB<,4>和LH<,6>與ATCh反應(yīng)1h后緩沖液pH值降低量依次為0.8625，0.582和0.678；但是3種肟類化合物與

8、碘化乙酰膽堿反應(yīng)后的pH值降低量依次為0.0158、0.0584和0.0299，實(shí)際接近0。 2．辛硫磷對(duì)幾種生物AChE的抑制中濃度(I<,50>)的測(cè)定 辛硫磷對(duì)番鴨腦AChE的I<,50>最高為9×10<'-4>，其次為對(duì)家兔腦AChE的2.4×10<'-4>，對(duì)小菜蛾AChE和鯽魚腦AChE的1<,50>均為1.8×10<'-4>，對(duì)菜蛾絨繭蜂AChE的I<,50>與對(duì)蟑螂頭部AChE的基本一致，分別為4.0

9、×10<'-5>和4.2×10<'-5>，對(duì)家蠅頭部AChE的I<,50>最低，僅為6×10<'-6>。 3．以I<,50>劑量的辛硫磷抑制幾種生物AChE分別測(cè)定其老化常數(shù) 用肟類化合物TMB<,4>分別測(cè)得I<,50>劑量的辛硫磷抑制的小菜蛾AChE、蟑螂頭部AChE和家兔腦AChE的老化常數(shù)分別為0.0129，0.0111和0.0173；老化時(shí)間t<,0.5>分別為53.7 h，62.4 h和40.06 h；t<,

10、0.99>分別為357 h，414.9 h和266.2 h。用肟類化合物L(fēng)H<,6>分別測(cè)得I<,50>劑量的辛硫磷抑制的菜蛾絨繭蜂AChE和鯽魚腦AChE老化常數(shù)依次為0.0143和0.0105；老化時(shí)間t<,0.5>分別為48.5 h和66 h；t<,0.99>分別為322.0 h和438.6 h。 4．三種肟類化合物對(duì)中毒AChE恢復(fù)能力比較 從3種肟類活化劑對(duì)鯽魚腦AChE和家兔腦AChE重活化能力比較來(lái)