O-GlcNAc糖基轉(zhuǎn)移酶對小鼠乳腺癌細胞遷移的影響.pdf

1、糖鏈及其綴合物不僅參與生命活動的基本生理生化過程，而且在疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。腫瘤細胞中的糖鏈與正常細胞相比有明顯變化，包括表達過量或減少、出現(xiàn)新的結(jié)構(gòu)等。糖鏈的合成沒有模板，而是通過一系列定位有序的糖基轉(zhuǎn)移酶完成的，糖基轉(zhuǎn)移酶表達差異將直接導(dǎo)致糖鏈結(jié)構(gòu)的變化。因此，從糖基轉(zhuǎn)移酶入手可以從本質(zhì)上闡明糖鏈在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的變化規(guī)律及調(diào)控作用。 本實驗以組織來源相同但轉(zhuǎn)移能力不同的三株小鼠乳腺癌細胞67NR、4TO

2、7、4T1為研究對象，利用基因芯片、實時定量PCR等技術(shù)系統(tǒng)地研究了小鼠迄今已知糖基轉(zhuǎn)移酶在不同轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細胞中的表達譜和差異表達譜，發(fā)現(xiàn)了19個差異表達的糖基轉(zhuǎn)移酶基因，它們可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。其中O-GleNAc糖基轉(zhuǎn)移酶(O-GlcNAc transferase，OGT)在不轉(zhuǎn)移的67NR細胞中低表達，而在高轉(zhuǎn)移的4T1細胞中高表達，其表達量為67NR的1.64倍。 O-GleNAc糖基轉(zhuǎn)移酶主要對細胞質(zhì)和核

3、內(nèi)蛋白質(zhì)進行O-GleNAc修飾。OGT 蛋白含有兩個功能結(jié)構(gòu)域，氨基端的三十四肽重復(fù)序列(tetratrieopeptiderepeat，TPR)和羧基端的催化結(jié)構(gòu)域。O-GlcNAc修飾是一種動態(tài)的、可誘導(dǎo)的、可調(diào)控的修飾方式，與磷酸化相似。迄今發(fā)現(xiàn)的O-GIcNAc修飾蛋白都具有磷酸化修飾，而且其修飾位點常與磷酸化位點相同或相鄰，即兩種修飾方式之間存在相互影響。由于O-GIcNAc修飾與磷酸化修飾的“陰一陽”關(guān)系，O-GIcNAc

4、修飾在許多生理和病理過程中發(fā)揮重要要作用。 為探討OGT在腫瘤細胞行為學(xué)方面的作用，我們利用RNA干擾技術(shù)在高轉(zhuǎn)移的4T1細胞中抑制OGT基因的表達。通過實時熒光定量PCR技術(shù)、流式細胞技術(shù)檢測RNA干擾對OGT基因表達的干擾效率；觀察OGT干擾后細胞形態(tài)變化，并在體外檢測了細胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力。實驗發(fā)現(xiàn)在4T1細胞中OGT基因沉默后，細胞增殖能力沒有變化，遷移和侵襲能力有明顯減弱。體外實驗結(jié)果提示我們，O-Gl