柔紅霉素對(duì)Jurkat細(xì)胞株促凋亡作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討柔紅霉素(DNR)致急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞株凋亡的作用因素，研究活性氧(ROS)在凋亡過程中的作用。 方法：①體外培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞株，加入DNR使終濃度分別為0.05，0.1，0.5，1ug/ml，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況；②MTT方法檢測(cè)DNR作用12、24、48h對(duì)Jurkat細(xì)胞株增殖的影響；③流式細(xì)胞儀檢測(cè)DNR作用下細(xì)胞內(nèi)ROS濃度及細(xì)胞株凋亡比例；④Hoechst/PI染色后熒光顯微鏡觀察DNR作用

2、下細(xì)胞株凋亡；⑤RT-PCR檢測(cè)DNR作用下bax、survivin、bcl-2和bcl-xl基因mRNA的表達(dá)；⑥觀察抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine，NAC)作用前后細(xì)胞內(nèi)ROS濃度、細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因變化。 結(jié)果：⑴DNR可明顯抑制Jurkat細(xì)胞株的活性，MTT檢測(cè)0.05、0.1、0.5、1 ug/ml DNR作用24 h細(xì)胞抑制率分別為（22.00±3.04）％、（33.65±1.42）

3、％、（40.52±2.35）％、（66.25±2.27）％；⑵0、0.05、0.1、0.5、1 ug/ml的DNR分別作用于Jurkat細(xì)胞株24h后，活性氧分別為(7.98±0.55)％、(8.88±0.86)％、(9.46±0.98)％、(17.48±2.98)％、(24.46±2.43)％，Jurkat細(xì)胞株ROS含量變化與DNR濃度呈正相關(guān)；⑶0、0.05、0.1、0.5、1ug/ml的DNR分別作用于Jurkat細(xì)胞株24h后

4、，Hoechst/PI染色熒光顯微鏡下可見細(xì)胞株凋亡，在DNR濃度0～1 ug/ml之間，0.5 ug/ml時(shí)早期凋亡細(xì)胞較多，為（12.33±1.15）％，AnnexinV/PI雙染流式檢測(cè)Jurkat細(xì)胞凋亡率分別為(11.41±1.44)％、(34.96±3.32)％、(45.58±3.12)％、(84.19±2.65)％、(87.93±1.74)％；⑷0、0.05、0.1、0.5、1ug/ml的DNR 作用下，Jurkat細(xì)胞株

5、ROS含量與細(xì)胞凋亡率有明顯相關(guān)性（P＜0.05）,NAC預(yù)處理組與對(duì)照組(DNR濃度為0.5 ug/ml)比較，Jurkat細(xì)胞株早期凋亡率由(12.44±2.16)％降至(7.96±3.72)％（P＜0.05），但兩組比較細(xì)胞總凋亡率下降無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；⑸抗氧化劑NAC作用下，促凋亡bax基因mRNA表達(dá)明顯下調(diào)，凋亡抑制基因survivin、bcl-2和bcl-xl的mRNA表達(dá)增高（P＜0.05）。 結(jié)論：①DNR能夠