單細(xì)胞水平β地中海貧血基因突變檢測(cè)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)胞的裂解是影響單細(xì)胞PCR擴(kuò)增效率的重要因素.該實(shí)驗(yàn)首先探討細(xì)胞裂解法對(duì)單細(xì)胞PCR擴(kuò)增效率的影響,尋求較好的細(xì)胞裂解法,為后續(xù)試驗(yàn)奠定基礎(chǔ),然后探討單個(gè)細(xì)胞水平同時(shí)檢測(cè)β地中海貧血多個(gè)突變技術(shù),同時(shí)為單個(gè)細(xì)胞水平運(yùn)用DNA陣列技術(shù)檢測(cè)多個(gè)基因突變位點(diǎn)的可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:實(shí)驗(yàn)分為2個(gè)部分:1.應(yīng)用顯微分離技術(shù)分離單個(gè)淋巴細(xì)胞,分別使用凍融變性和Rechitsky等的蛋白酶K裂解法處理單細(xì)胞,應(yīng)用多重PCR同時(shí)擴(kuò)增X染色體特異重

2、復(fù)序列(DXZ1)和 Y 染色體特異重復(fù)序列(DXZ1)對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行性別診斷,比較其擴(kuò)增效率,尋求較好的細(xì)胞裂解方法.2.將中國(guó)β地中海貧血常見(jiàn)8種突變點(diǎn)(CD41-42、IVS-II-654、CD17、TATA box nt-28、CD71-72、TATAbox nt-29、CD26、IVS-I-5)的等位特異性寡核苷酸(allele specific oligonucleiotide,ASO)探針點(diǎn)樣于尼龍膜上,制備β地中海貧血常見(jiàn)