色素萬(wàn)壽菊psy雙邊界載體及遺傳轉(zhuǎn)化體系建立和SSR-PCR體系的優(yōu)化.pdf

1、萬(wàn)壽菊（Tageteserecta L.）不僅是重要的園林花卉，具有極高的觀賞價(jià)值，而且花是提取葉黃素的優(yōu)質(zhì)材料，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究以色素萬(wàn)壽菊雄性不育兩用系為材料，根據(jù)gus基因瞬時(shí)表達(dá)的情況，建立根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的以萬(wàn)壽菊下胚軸為外植體的遺傳轉(zhuǎn)化體系，通過(guò)分子標(biāo)記和PCR技術(shù)，對(duì)色素萬(wàn)壽菊雄性不育兩用系的S SR-PC R體系進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)構(gòu)建葉黃素代謝途徑中關(guān)鍵酶基因psy的雙邊界表達(dá)載體，為獲得高葉黃素含量的萬(wàn)壽菊轉(zhuǎn)基因品

2、種奠定基礎(chǔ)，本研究結(jié)果如下：
　　(1)建立了色素萬(wàn)壽菊雄性不育兩用系遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　根據(jù)gus基因瞬時(shí)表達(dá)的情況，優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化條件，建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件為：外植體為下胚軸，預(yù)培養(yǎng)2d，農(nóng)桿菌濃度OD600=1.0，1/2MS0懸浮，1/2MS0懸浮液和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中AS濃度為100μmol/L，侵染采用80W、5min的超聲波處理后，黑暗共培養(yǎng)2d。
　　(2)構(gòu)建了葉黃素生物

3、合成途徑中關(guān)鍵酶基因psy的雙邊界載體。
　　提取萬(wàn)壽菊花總R NA，RT-P CR獲得c DNA，根據(jù)G enBank中萬(wàn)壽菊psy的編碼序列設(shè)計(jì)特異引物，PCR擴(kuò)增psy將其連接到雙邊界載體上，從而得到了植物表達(dá)載體，并采用“凍融法”將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105菌株中。
　?。?）對(duì)色素萬(wàn)壽菊雄性不育兩用系的SSR-PCR體系進(jìn)行優(yōu)化。以色素萬(wàn)壽菊雄性不育兩用系為材料，通過(guò)對(duì)SSR-PCR反映體系中的主要因素dNT