內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷的機(jī)制及生長(zhǎng)抑素的影響.pdf

1、目的:從炎癥和氧化應(yīng)激損傷兩方面研究?jī)?nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷的動(dòng)態(tài)改變及生長(zhǎng)抑素(Somatostatin，SST)對(duì)其的影響和可能的干預(yù)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.建模
　　 取標(biāo)本將96只SPF級(jí)ICR小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=24)，SST對(duì)照組(n=24)，內(nèi)毒素血癥組(n=24)，SST干預(yù)組(n=24)。正常對(duì)照組和SST對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，內(nèi)毒素血癥組和SST干預(yù)組腹腔注射內(nèi)毒素（12mg

2、/kg），SST對(duì)照組和SST干預(yù)組分別于0.5h、2h、6h、12h皮下注射思他寧（20μg/kg）。所有小鼠分別于3h、8h、16h活殺留取標(biāo)本。
　　 2.大體指標(biāo)觀察
　　 觀察內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷的行為學(xué)改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響，包括皮毛、呼吸、飲食、活動(dòng)及精神狀態(tài)等方面;烘干法測(cè)定肺組織濕干重比值(W/D);光鏡下觀察肺組織的病理改變。
　　 3.分子水平檢測(cè)
　　 3.1酶聯(lián)免疫吸附法(

3、ELISA)檢測(cè)小鼠血清中SST、TNF-α、IL-6、IL-10和肺組織NQO-1的含量變化;
　　 3.2化學(xué)比色法檢測(cè)小鼠肺組織MDA含量和SOD、CAT活力等氧化還原指標(biāo);
　　 3.3 RT-PCR法檢測(cè)小鼠肺組織TLR4、NF-κBp65及Nrf2 mRNA的表達(dá);
　　 3.4 Western Blot法檢測(cè)肺組織TLR4、NF-κBp65及Nrf2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　

4、1.大體指標(biāo)
　　 1.1內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷行為學(xué)改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 正常對(duì)照組和SST對(duì)照組小鼠皮毛光滑，反應(yīng)敏捷，呼吸平穩(wěn)，活動(dòng)自如;內(nèi)毒素血癥組小鼠皮毛粗糙無光，呼吸頻促，精神萎靡，蜷縮少動(dòng)，嗜睡，進(jìn)食飲水減少，口唇肢端發(fā)紺，眼周血性分泌物明顯增多，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，癥狀逐漸加重;SST干預(yù)組小鼠癥狀較內(nèi)毒素血癥組明顯減輕。
　　 1.2內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織濕干重比值的改變及生長(zhǎng)抑

5、素對(duì)其的影響
　　 與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠8h、16h肺組織濕干重比值明顯增高，且隨著時(shí)間推移逐漸加重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠肺組織濕干重比值明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.3內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織病理改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 正常對(duì)照組和SST對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)清楚，肺泡壁薄，邊緣完整，肺泡腔內(nèi)無液體或炎性細(xì)胞，肺間質(zhì)無炎性滲出;內(nèi)毒素血癥

6、組小鼠肺組織充血，肺泡塌陷，肺泡隔增厚，部分肺泡腔內(nèi)可見液體滲出以及肺間質(zhì)水腫并有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，隨時(shí)間推移逐漸加重，16h受損最明顯;SST干預(yù)組小鼠肺組織充血較輕s，肺泡塌陷、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的程度比內(nèi)毒素血癥組有明顯減輕，肺間質(zhì)水腫程度也減輕。
　　 2.分子水平檢測(cè)
　　 2.1內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織炎癥損傷的動(dòng)態(tài)改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 (1)內(nèi)源性生長(zhǎng)抑素水平與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小

7、鼠3h、8h、16h各時(shí)間點(diǎn)血清SST水平明顯升高，且于8h達(dá)峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　 (2)細(xì)胞因子水平的改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠3h、8h、16h各時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α、IL-6和IL-10水平均顯著升高，并分別于8h、16h、16h達(dá)峰值;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著降低，而IL-10于3h、8h顯著升高，但16h時(shí)已明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義。
　　 (3)肺組織TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白的表達(dá)變化及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織3h、8h、16h TLR4、NF-κBmRNA和蛋白表達(dá)量顯著增高，分別于16h、8h達(dá)峰值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠肺組織TLR4、NF-κB mRNA表達(dá)量于8h、16h明顯降低，而TLR4、NF-κB p65的蛋白表達(dá)量于3h、8h、16h均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)

9、學(xué)意義。
　　 2.2內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織氧化應(yīng)激損傷的動(dòng)態(tài)改變及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 (1)肺組織MDA的含量和SOD、CAT活力的變化及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織MDA含量3h、8h、16h明顯升高，SOD、CAT活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠肺組織MDA含量明顯降低，SOD活力于8h、16h明顯升高，CAT活力3h

10、、8h、16h均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)肺組織NQO-1的含量變化及生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠3h、8h、16h各時(shí)間點(diǎn)肺組織NQO-1含量均顯著升高，并于8h達(dá)峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠肺組織NQO-1含量于8h、16h明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而3h升高不明顯。
　　 (3)肺組織Nrf2 mRNA和蛋白的表達(dá)變化及

11、生長(zhǎng)抑素對(duì)其的影響
　　 與正常對(duì)照組比較，內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織Nrf2的mRNA和蛋白的表達(dá)量于3h、8h、16h顯著升高;與內(nèi)毒素血癥組比較，SST干預(yù)組小鼠肺組織Nrf2 mRNA表達(dá)量于3h、8h、16h明顯升高，Nrf2蛋白于8h、16h表達(dá)量有明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.內(nèi)毒素血癥急性肺損傷的可能機(jī)制失控性的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激損傷是內(nèi)毒素血癥急性肺損傷的重要發(fā)病機(jī)制之一。

12、LPS激活TLR4，啟動(dòng)細(xì)胞的固有免疫，釋放炎癥因子，激活NF-κB,進(jìn)而啟動(dòng)炎性細(xì)胞因子的基因表達(dá)，通過正反饋，造成炎癥失控。同時(shí)，炎癥會(huì)引起中性粒細(xì)胞等在肺內(nèi)積聚，造成呼吸爆發(fā)，釋放出大量的活性氧，引起脂質(zhì)過氧化，通過級(jí)聯(lián)放大，造成細(xì)胞毒性和臟器損傷。
　　 2.生長(zhǎng)抑素干預(yù)的可能機(jī)制生長(zhǎng)抑素作為一種抑制性神經(jīng)肽，可抑制P物質(zhì)的作用，具有免疫調(diào)節(jié)和降低細(xì)胞因子釋放的功能。它能調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖分化，降低淋巴細(xì)胞的活性和中性粒細(xì)胞