依達拉奉對實驗性大鼠視網膜光損傷的保護作用.pdf

1、光是視覺系統(tǒng)進化以及發(fā)育的動力，視網膜是形成視覺的重要組織，外界光線只有到達正常功能的視網膜才能形成視覺。任何光線的強度、光照時間等超過了視網膜的承受力都會造成視網膜光損傷。
　　 本實驗通過對光損傷大鼠行腹腔內注射氧自由基清除劑依達拉奉，觀察光照后不同時間視網膜組織病理學改變，檢測光損傷后視網膜組織內氧自由基的表達，探討視網膜光損傷的發(fā)生機制以及氧自由基清除劑依達拉奉對光損傷視網膜的保護作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　

2、　 我們選用的實驗動物為SD大鼠(雌雄不限，7-10周齡，體重220±20g)隨機分成四組。Ⅰ組：正常對照組(n=32)；Ⅱ組：光損傷組(n=32)；Ⅲ組：生理鹽水+光損傷組(n=32)；Ⅳ組：依達拉奉+光損傷組(n=32)。分別于光照后0.5、1、6、10d各時相點取八只動物。
　　 實驗前所有大鼠均在12h明(120±10lux)12h暗的循環(huán)光環(huán)境下飼養(yǎng)7d。暗適應36h后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三組乙醚吸入麻醉，散瞳，縫線開瞼。待大

3、鼠清醒后放入自制光照箱中(光照度13260±440lux)照射2h。光照前3dⅢ組大鼠每天腹腔注射生理鹽水3mg/kg一次，Ⅳ組大鼠每天腹腔注射依達拉奉3mg/kg一次。分別于光照后0.5、1、6、10d處死大鼠摘取眼球視網膜組織。右眼的視網膜組織行HE以及TUNEL(終末脫氧核糖核苷酸轉移酶介導的原位末端缺口標記法，TDT-mediated dUTP nick-end labeling method，TUNEL)法染色，光鏡下觀察組織

4、細胞病理學改變，分析視網膜外核層(out nuclear layer,ONL)厚度變化，檢測視網膜外核層凋亡細胞數(shù)(用凋亡指數(shù)表示)。左眼的視網膜組織分別應用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。通過以上研究方法來探討視網膜光損傷的發(fā)生機制，了解氧自由基與視網膜光損傷的關系。
　　 實驗研究結果可見以下改變(1)視網膜組織形態(tài)學結果：Ⅰ組大鼠視網膜組織形態(tài)正常，結構層次分明，內外節(jié)排列

5、規(guī)整，分界清晰；Ⅱ組和Ⅲ組大鼠視網膜外核層隨時間延長逐漸變薄，內外節(jié)腫脹，核碎裂，排列紊亂，TUNEL染色可見較多陽性感光細胞核，在1d時較為明顯；Ⅳ組與Ⅲ組視網膜組織在對應時間點相比較可見感光細胞核排列較為緊密，內外節(jié)結構較為完整、清楚，視網膜色素上皮細胞與感光細胞的外節(jié)銜接較好。(2)視網膜外核層厚度檢測：Ⅰ組視網膜外核層厚度最厚，組內各時相點統(tǒng)計差別無顯著性意義(P＞0.05)。Ⅱ組和Ⅲ組視網膜外核層厚度隨光照后時間延長逐漸變薄，

6、組內各時相比較均有顯著性意義(P＜0.05).兩組間比較無統(tǒng)計學差別。Ⅳ組外核層厚度隨時間變化亦呈逐漸變薄的趨勢，各時相點與Ⅲ組的比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05).(3)凋亡細胞檢測：Ⅰ組視網膜外核層偶可見被TUNEL染色法標記的陽性凋亡細胞核;Ⅱ組和Ⅲ組在光照后1d凋亡細胞核染色陽性最多，凋亡指數(shù)最高，6d時明顯減少。組間各時相無明顯差異(P＞0.05)。Ⅳ組各時相凋亡指數(shù)均小于Ⅱ組和Ⅲ組，差異有顯著性意義。(4)視網膜組織中MDA含

7、量和SOD濃度的變化：Ⅱ組和Ⅲ組視網膜光損傷后MDA濃度在第1d時最高(P＜0.01)，之后有所降低;SOD活性明顯降低，在第1d最低(P＜0.01)，之后有所升高，兩組間無明顯差異；Ⅳ組MDA濃度在光損傷后0.5、1d和6d明顯低于Ⅲ組，但是高于正常對照組，SOD活性各時相均明顯高于Ⅲ組而低于正常對照組，組間指標比較差異均有顯著性意義(P＜0.01)。
　　 通過該實驗研究我們認為光照引起的視網膜損傷是一種細胞凋亡的改變，視網