北柴胡不定根培養(yǎng)中生物轉(zhuǎn)化與皂苷合成研究.pdf

1、北柴胡(Bupleurum chinense DC.）是《中華人民共和國藥典》(2005版)規(guī)定的柴胡正品藥材的原植物，以根入藥，根中的柴胡皂苷為主要有效成分，其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d已被確認為藥理活性化合物，具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗肝損傷、抗病毒等功效。
　　本研究以三種晉產(chǎn)北柴胡不定根為研究對象，通過向根離體培養(yǎng)體系中添加前體物質(zhì)、誘導子并應用半連續(xù)培養(yǎng)方式進行培養(yǎng)，探討了不同處理對不定根合成柴胡皂苷的影響，建立了北柴

2、胡不定根生產(chǎn)柴胡皂苷的離體培養(yǎng)體系。
　　主要研究內(nèi)容有:
　　(1)建立了柴胡皂苷的標準曲線。
　　(2)通過添加丙酮酸鈉、檸檬酸和甘氨酸等前體物質(zhì)和水楊酸、苯甲酸、硫酸鎂、硝酸鉀、氯化鈷、氯化鈣和硝酸銀等誘導子，研究了添加物對柴胡皂苷轉(zhuǎn)化合成的作用。
　　(3)研究了半連續(xù)培養(yǎng)法（包括補加培養(yǎng)基和多步控糖法）對柴胡皂苷轉(zhuǎn)化合成的影響。
　　研究結(jié)果表明:
　　(1)在附加0.37g/L硫酸鎂、3.

3、0mmol/L丙酮酸鈉、9.5g/L硝酸鉀、0.5mg/L二苯基脲雙磺酸鈣(DSC)和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，左權北柴胡不定根中的皂苷含量最高;在附加1.11g/L硫酸鎂、1.9g/L硝酸鉀、3.0mmol/L丙酮酸鈉、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，太谷北柴胡不定根中皂苷含量最高;在附加2.0mmol/L丙酮酸鈉、1.85g/L硫酸鎂、1.9g/L硝酸鉀、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/

4、2MS培養(yǎng)基中，方山北柴胡不定根中的皂苷含量最高。
　　(2)在1/2MS+0.37g/L硫酸鎂+3.0mmol/L丙酮酸鈉+9.5g/L硝酸鉀+0.5mg/LDSC+50g/L蔗糖培養(yǎng)基中繼續(xù)添加1.00mol/L甘氨酸、0.10mmol/L檸檬酸及0.01mmol/L苯甲酸，左權北柴胡不定根中柴胡皂苷的含量達到0.291％，相比提高了0.142％。
　　(3)在附加1.25mg/L氯化鈷、0.01mmol/L硝酸銀、0.

5、22g/L氯化鈣、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，左權北胡不定根中柴胡皂苷的含量達到最高;在附加12.5mg/L氯化鈷、0.22g/L氯化鈣、0.10mmol/L硝酸銀、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，太谷北柴胡不定根中柴胡皂苷的含量最高;在附加0.01mmol/L硝酸銀、12.5mg/L氯化鈷、0.44g/L氯化鈣、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，方山北柴胡

6、不定根中的柴胡皂苷含量最高。
　　(4)左權北柴胡和太谷北柴胡不定根的生長與柴胡皂苷合成對水楊酸的濃度要求相近。當水楊酸濃度為0.001mmol/L時，無論是不定根的增殖量還是皂苷含量都達到最大值。
　　(5)在多步控糖法培養(yǎng)過程中，不定根的增殖量和皂苷含量在蔗糖總濃度為50g/L時達到最大值。
　　(6)在不定根培養(yǎng)的第30d時補加新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)到第60d時，太谷北柴胡和方山北柴胡不定根的長勢和皂苷含量最好，左