兒茶素類蛋白酶體抑制劑的設計合成和初步活性評價.pdf

1、大部分真核生物細胞內的蛋白降解由泛素一蛋白酶體途徑(UPP)所調控。有文獻報道細胞內超過80％的蛋白都在蛋白酶體降解，這其中不僅包括短半壽期和長半壽期蛋白，而且包括腫瘤抑制因子、轉錄因子和細胞周期蛋白。蛋白酶體(proteasome)是一個廣泛分布于真核細胞細胞質和細胞核中的多亞基大分子復合物，是一種具有多種蛋白水解功能的大分子復合物，它在承擔細胞內蛋白質降解的泛素一蛋白酶體通路中起催化作用。蛋白酶體不僅可以催化異常蛋白質的降解，而且在

2、許多關鍵蛋白質的調控方面發(fā)揮著重要作用，這些蛋白質涉及到癌癥和免疫性疾病等人類疾病的發(fā)病機制，是細胞代謝的一個重要組成部分[1]。而且，proteasome抑制劑對多種腫瘤有抑制效果[2]，如含硼酸基的三肽蛋白酶體抑制劑萬珂(Velcade)于2005年11月獲得美國FDA批準上市，用于治療骨髓瘤。因此，蛋白酶體已成為一個理想的藥物開發(fā)的靶點，應用蛋白酶體抑制劑改變其酶切位點活性已成為目前抗腫瘤研究的熱點。 分子生物學研究發(fā)現(xiàn)表

3、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對蛋白酶體(proteasome)有很強的抑制活性，體外活性IC50=86nM，體內活性18μM。EGCG是茶葉中最主要的活性成分。然而，作為先導化合物EGCG眾多的酚羥基導致化學性質不穩(wěn)定，極易氧化變質；其極性過大不利穿透細胞膜，生物利用度降低。小鼠口服56 mg EGCG，僅能吸收0.012％。EGCG在堿性或中性環(huán)境中不穩(wěn)定性，所以EGCG在人體內不穩(wěn)定，生物利用度降低。為了提高EGCG的穩(wěn)定性，

4、用氟代苯甲酸替換沒食子酸，設計和半合成了16個全新的EGCG類似物，減少了分子中易被氧化的酚羥基的數(shù)目，同時合成了6個EGCG甲基化衍生物。初步活性測試顯示，其中4個G環(huán)氟取代的化合物5，6，7，8對proteasome抑制活性稍強于EGCG;全乙酰化的含氟EGCG類似物(5b，6b，7b，8b)對白血病Jurkat T細胞抑制活性明顯高于全乙?；腅GCG。 本論文共半合成了30個全新化合物，包括22個目標化合物，目標化合物及

5、部分重要中間化合物的結構都經過核磁共振氫譜和質譜驗證。 本論文的具體內容包括：第一在實驗室已建立的對茶多酚粗提物衍生化再提取的方法基礎上，以較理想的收率和較簡便的操作方法，得到了純的中間體即芐基保護的EGC(Bn-EGC)、甲氧基保護的EGC(Me-EGC)，這些是合成EGCG類似物的最關鍵中間體；利用半合成方法合成EGCG類似物。第二，HPLC跟蹤乙酰化EGCG水解過程，確定水解時間，有效地避免了EGCG多種副反應的發(fā)生，優(yōu)化