DR4基因啟動子甲基化對TRAIL誘導肺鱗癌細胞凋亡作用的影響.pdf

1、背景及目的:
　　聯(lián)合放化療目前是治療肺鱗癌患者的主要臨床治療模式，但有效率出現(xiàn)瓶頸現(xiàn)象，因此尋找新的、高效的、毒副反應(yīng)小的抗腫瘤藥物成為腫瘤基礎(chǔ)和臨床研究的熱點。TRAIL是一種新型生物制劑，其可以誘導腫瘤細胞凋亡，對正常組織無明顯損傷。但是多數(shù)腫瘤對其耐藥，其原因機制有很多，有研究報道可能與其細胞表面死亡受體4(DR4)基因啟動子甲基化有關(guān)，逆轉(zhuǎn)基因甲基化可能提高TRAIL誘導腫瘤細胞凋亡作用。因此本文以肺鱗癌為研究對象，探討

2、DR4基因啟動子甲基化與DR4表達的關(guān)系，進一步研究DR4基因啟動子甲基化狀態(tài)是否會影響TRAIL對肺鱗癌細胞的誘導凋亡作用，為肺鱗癌的治療提供新的治療策略。
　　方法:
　　1、采用Elivision二步法檢測臨床組織DR4的表達情況;
　　2、采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測臨床組織DR4的甲基化狀態(tài);
　　3、采用MSP法檢測5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺鱗癌細胞株(H226、SK

3、-MES-1、H520)前后DR4基因啟動子甲基化狀態(tài);
　　4、采用RT-PCR和Western blot法檢測5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺鱗癌細胞株(H226、SK-MES-1、H520)前后DR4基因mRNA及蛋白表達情況;
　　5、采用MTT法檢測肺鱗癌細胞增殖抑制率;
　　6、采用流式細胞儀檢測肺鱗癌細胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1、臨床研究結(jié)果如下，甲基化特異性PCR(M

4、SP)結(jié)果顯示，在36例肺鱗癌患者中DR4基因啟動子有80.6％處于甲基化狀態(tài)，甲基化狀態(tài)與肺鱗癌患者的年齡、性別、吸煙、病理分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無相關(guān)性（P＞0.05）。免疫組化結(jié)果表明，36例肺鱗癌患者中DR4低表達概率約為58.3％（36例中有21例），有4例為未表達，17例為低表達，10例為中高度表達，5例為高表達。同時研究還證實肺鱗癌DR4的表達水平與其基因啟動子甲基化程度有關(guān)(P＜0.05)。

5、>　　2、體外實驗研究結(jié)果如下，MSP表明H226、SK-MES-1細胞DR4基因呈甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白均低表達，H520呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白高表達;5-Aza-CdR干預后H226、SK-MES-1細胞DR4基因呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白表達較前均顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），H520仍呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白表達量較前無明顯差異。同時研究還證實TRAIL對H226、SK-MES-1細胞