轉(zhuǎn)化生長因子β-,1-聯(lián)合血管內(nèi)皮細胞生長因子體外誘導胚胎干細胞向內(nèi)皮細胞分化.pdf

1、目的：觀察胚胎干細胞在體外不同條件下定向誘導分化血管內(nèi)皮細胞的能力。 方法：成年昆明小鼠由南昌大學醫(yī)學院動物科學部提供，經(jīng)自然交配懷孕。取12.5～14.5d胎鼠，制作小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層。在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)擴增129×1/SvJ胚胎干細胞。將飼養(yǎng)層上擴增的胚胎干細胞以0.25％胰酶消化，按1×10 4/ml胚胎干細胞懸液懸滴在細胞培養(yǎng)皿的蓋上，每滴10～20 μL，不換液，3d后形成擬胚體。挑選狀態(tài)好的擬胚體

2、分3組：①轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導組、②血管內(nèi)皮細胞生長因子誘導組、③轉(zhuǎn)化生長因子β1＋血管內(nèi)皮細胞生長因子誘導組。采用RT—PCR和免疫細胞化學方法證實誘導的細胞是否為內(nèi)皮細胞。 結(jié)果： ①在存在MEF飼養(yǎng)層并加LIF時，體外支持ES細胞的生長擴增，能維持ES細胞迅速生長而未見明顯的分化。ES細胞特點：在MEF飼養(yǎng)層上形成的ES細胞克隆，結(jié)構(gòu)致密，似鳥巢狀。 ②3組中擬胚體貼壁后第2天，胚體均略攤開，周圍有上皮樣細

3、胞出現(xiàn)，第3，4天有許多卵石樣細胞產(chǎn)生，至第6天開始出現(xiàn)由卵石樣細胞構(gòu)成的管狀結(jié)構(gòu)，誘導時間約2周。轉(zhuǎn)化生長因子β1＋血管內(nèi)皮細胞生長因子誘導組中產(chǎn)生的管樣結(jié)構(gòu)的擬胚體數(shù)較轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導組、血管內(nèi)皮細胞生長因子誘導組多。三組均數(shù)分別為44.67±3.88、28.17±6.08和33.00±2.68。 ③3組中誘導分化的卵石樣細胞形態(tài)漸呈梭形，RT—PCR檢測可有特異性的擴增條帶出現(xiàn)，與DNAmark相比較，條帶位置相符。擴