冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法建立小鼠心肌梗死模型的病理及心功能變化的觀察.pdf

1、心肌梗死(myocardial infarction，MI)在臨床上的發(fā)病率及死亡率非常高，已成為威脅人類健康的重大疾病之一。對(duì)MI發(fā)病機(jī)制的研究是提高治愈率和開展新療法的重要基礎(chǔ)。而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是研究進(jìn)入臨床階段前的必需過程。因此，選擇合適的動(dòng)物和接近于臨床MI發(fā)生的模型復(fù)褂方法是研究的前提。國內(nèi)尚未見到應(yīng)用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎(coronary artery ligation，CAL)法制作小鼠MI模型，本文采用CAL法制作小鼠MI模型并觀察其

2、病理與心功能變化，探討MI發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。 方法 1．動(dòng)物分組： 根據(jù)研究目的，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分13組；其中12組需手術(shù)制作模型，合稱手術(shù)組，另一組為假手術(shù)組。手術(shù)組分為梗死后30min組、1h組、2h組、4h組、1d組、2d組、3d組、5d組、7d組、10d組、14d組、28d組。為滿足每組8只的要求，先后有110只動(dòng)物隨機(jī)進(jìn)入手術(shù)組(96只)與假手術(shù)組(14只) 2．動(dòng)物模型制作：

3、 小鼠稱重后，皮下注射阿托品抑制呼吸道分泌物，30min后，氯胺酮80mg/Kg腹腔注射，麻醉滿意后置于手術(shù)臺(tái)上，四肢及皮下連接心電圖電極，記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，氣管插管接呼吸機(jī)，進(jìn)行機(jī)械通氣。小鼠右側(cè)臥位固定于臺(tái)上，左前胸去毛，消毒鋪巾，沿肋間隙方向于胸骨左旁第3肋間隙切開皮膚，逐層分離皮下組織、肌肉，撐開進(jìn)胸，剪開心包，在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐間可見左冠狀動(dòng)脈前降支起始部，用6-0尼龍縫線結(jié)扎中1/3，待動(dòng)物的數(shù)十次心動(dòng)周期

4、后，收線打結(jié)，以心電圖心肌梗死的特征性改變?yōu)橹笜?biāo)確定模型復(fù)制成功。觀察數(shù)分鐘后，增大潮氣量，提高呼吸頻率，充分?jǐn)U張肺后徹底止血，逐層關(guān)胸，關(guān)胸過程中于切口內(nèi)放置引流管。待小鼠自主呼吸恢復(fù)，拔出氣管插管。術(shù)后肌注青霉素2萬U。假手術(shù)組僅在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐間左冠狀動(dòng)脈前降支同樣位置穿線而不結(jié)扎，余操作同手術(shù)組。 3．心臟超聲檢查： 采用美國HPSONOS 5500型超聲顯像儀，相控陣探頭頻率7．5MHz。分別于結(jié)扎冠狀

5、動(dòng)脈前和結(jié)扎后8d測(cè)量室間隔(IVS)、左室舒張末內(nèi)徑(LVDd)、左室收縮末內(nèi)徑(LVDs)、左室后壁(PW)、短軸縮短率(Fs)、射血分?jǐn)?shù)(EF)。并取左室長軸切面行M型心臟超聲檢查。所有資料均經(jīng)錄像后脫機(jī)分析，計(jì)數(shù)資料連續(xù)測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期取平均值。 4．組織病理切片： 剪下心臟，用生理鹽水洗凈血塊，浸泡于10％甲醛溶液中固定24h，經(jīng)過結(jié)扎點(diǎn)位置橫斷心臟，制作石蠟切片。 結(jié)果 1．心電圖及大體表現(xiàn)

6、 假手術(shù)組動(dòng)物均合格，心電圖及術(shù)中肉眼觀正常。手術(shù)組結(jié)扎瞬間心電圖表現(xiàn)為一過性ST段弓背向上抬高。肉眼觀可見遠(yuǎn)端心肌活動(dòng)度減弱或消失，左室前壁蒼白后紫紺。1～20 min后出現(xiàn)不同程度的ST段弓背向上抬高，無或僅有短暫的心律失常。2周后再次復(fù)查心電圖，手術(shù)組表現(xiàn)有①ST段弓背向上抬高；②QRS波群幅度降低；③ST段低平等。開胸后肉眼觀為左室前外側(cè)壁可見不規(guī)則形心肌變白區(qū)，心肌活動(dòng)減弱或消失，甚至有反常運(yùn)動(dòng)。術(shù)后4周開胸并復(fù)查心

7、電圖，手術(shù)組動(dòng)物心電圖與假手術(shù)組相比無明顯變化，但肉眼觀有不同程度的心肌變白區(qū)的擴(kuò)大。 2．心臟超聲檢查 小鼠結(jié)扎后，左室舒張末、收縮末內(nèi)徑增大；短軸縮短率、射血分?jǐn)?shù)降低。 3．病理切片 假手術(shù)組動(dòng)物心臟結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維排列整齊，未見斷裂、變性及壞死，間質(zhì)內(nèi)未見炎細(xì)胞浸潤，心內(nèi)膜、心外膜亦未見異常改變；心肌梗死后1h心肌內(nèi)尚無炎癥細(xì)胞浸潤；心肌梗死后3d可見大量的炎性細(xì)胞浸潤及心肌細(xì)胞膜不完整表現(xiàn)；5

8、d時(shí)梗死相關(guān)區(qū)的炎癥反應(yīng)最強(qiáng)，可見大量中性粒細(xì)胞浸潤，心肌纖維排列紊亂；7d可見心肌纖維斷裂、心肌細(xì)胞壞死；14d時(shí)，梗死區(qū)心肌纖維紅染，間隙增寬，橫紋消失，核固縮或溶解，梗死區(qū)邊緣可見充血，出血帶及不等量中性粒細(xì)胞浸潤；28d時(shí)心梗區(qū)鏡下基本全部是纖維母細(xì)胞和纖維細(xì)胞以及致密的膠原纖維束，呈束狀或平行狀排列，膠原纖維束之間幾無殘存的存活心肌組織，炎性細(xì)胞浸潤已少見。 結(jié)論：1．冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法可成功建立小鼠心肌梗死模型。2．病理