海島棉抗黃萎病基因分子標(biāo)記研究.pdf

1、本研究利用海島棉與陸地棉種間配制的雜交組合，對海島棉黃萎病抗性鑒定、分子標(biāo)記和與抗性相關(guān)的分子標(biāo)記的克隆等內(nèi)容進(jìn)行了深入的研究。其目的在于：找到與黃萎病抗性基因連鎖的分子標(biāo)記并克隆該標(biāo)記，為最終克隆棉花黃萎病抗性基因及分子標(biāo)記輔助育種奠定基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下： 1.陸地棉感病品種中棉所8號×海島棉抗病品種Pima90-53組合的F2及F2：3家系的中等致病力的黃萎病菌系抗性鑒定結(jié)果表明，F(xiàn)2群體中的單株及通過F2：3家系鑒定

2、所對應(yīng)的F2單株中，抗病單株：感病單株的比例符合3：1的卡方適合性測驗(yàn)。 2.用768對SSR引物對中棉所8號×Pima90-53組合含有182個(gè)單株的F2群體的抗、感基因池進(jìn)行擴(kuò)增，在這些引物中BNL3255和BNL2440引物在該組合的抗、感基因池之間表現(xiàn)多態(tài)性，且這兩對引物在該組合親本的相應(yīng)位置上也存在多態(tài)性。其中，BNL3255在抗、感基因池間擴(kuò)增出一條大小為208bp的多態(tài)性片斷，定名為BNL3255-208。利用這兩

3、對引物對該組合F2單株進(jìn)行SSR擴(kuò)增，并利用MAPMAKER/EXP(VERSION3.0b)軟件對擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果表明，BNL3255-208標(biāo)記與黃萎病抗性基因連鎖，且它們之間的遺傳距離為13.7cM，BNL2440擴(kuò)增出的多態(tài)性標(biāo)記與黃萎病抗性基因之間不連鎖。用356對AFLP引物對該組合的F2抗、感基因池進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明在該組合的抗、感基因池之間未能找到差異引物。 4.用中棉所8號×Pima90-53組合含有21

4、5個(gè)單株及含有100個(gè)單株的兩個(gè)F2群體進(jìn)行BNL3255-208標(biāo)記的應(yīng)用性驗(yàn)證，結(jié)果表明分別有71.75﹪和88.61﹪的抗病單株上存在該標(biāo)記，該標(biāo)記可以作為分子標(biāo)記輔助選擇的一種驗(yàn)證手段在育種實(shí)踐中加以應(yīng)用。 5.通過基因工程的手段將與抗病相關(guān)的差異帶BNL3255-208回收，并進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化、克隆、測序，結(jié)果表明該差異帶是一條長211bp的、含10次TG重復(fù)的片段。通過測序，該片段可以為細(xì)菌人工染色體(BAC)文庫的篩