牛源性大腸桿菌耐藥基因流行病學(xué)調(diào)查及耐藥突變選擇窗的應(yīng)用.pdf

1、臨床上大多選擇使用抗生素控制感染，最先應(yīng)用于人類細菌感染，隨后人們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于動物也能取得良好的療效，應(yīng)用也越來越普遍，隨之細菌耐藥性越來越強，從而使治療細菌感染越來越困難。大腸桿菌是臨床上引起動物腹瀉、敗血癥等疾病的重要的病原菌之一，其攜帶的纖毛粘著抗原如F17能在小腸粘膜上起定居作用，易引起犢牛腹瀉，奶牛乳房炎、子宮炎等致死性疾病，給廣大養(yǎng)殖戶來巨大損失。臨床上使用抗生素一般基于最小抑菌濃度(MIC)，且多單獨用藥，使得細菌極易獲得耐

2、藥性。隨著耐藥突變選擇窗(MSW)理論研究的深入，聯(lián)合不同抗菌機理的抗生素進行臨床治療可降低細菌耐藥性的產(chǎn)生。本研究就是基于MSW理論，聯(lián)合頭孢噻肟和恩諾沙星，結(jié)果顯示頭孢噻肟聯(lián)合恩諾沙星能夠縮小甚至關(guān)閉其單藥的MSW，防止耐藥的產(chǎn)生。
　　為探討聯(lián)合用藥對攜帶F17毒力基因牛源性大腸桿菌耐藥突變選擇窗的影響，從63株致病性牛源大腸桿菌受試菌株中篩選出了11株攜帶F17毒力基因的菌株。通過Kirby-Bauer藥敏試驗測定了19種

3、抗生素的敏感性，PCR方法檢測了21個耐藥基因。實驗結(jié)果顯示藥物耐藥現(xiàn)狀十分嚴重:11株受試菌株全部呈現(xiàn)多重耐藥，少則4重耐藥，多則達到17重耐藥，其中鏈霉素(S)耐藥率最高為81.8％，多粘菌素(PB)耐藥率最低為0％，其次氨曲南(AZT)耐藥率也僅為18.2％;而氨芐西林(AM)、阿莫西林(AMX)、頭孢氨芐(CL)、慶大霉素(GM)、多西環(huán)素(DOX)、土霉素(OT)、氟苯尼考(FFC)、甲氧芐啶(SXT)、環(huán)丙沙星(CIP)、洛

4、美沙星(LMF)、恩諾沙星(ENR)、諾氟沙星(NOR)耐藥率都在50％以上，頭孢克肟(CFX)、頭孢曲松(CRO)、頭孢噻肟(CTX)、卡那霉素(K)四種抗菌藥物耐藥率都在50％以下。而對于耐藥基因的檢測結(jié)果顯示tetA、tetB、GyrA檢出率為100％，blaTEM、parC檢出率為90.90％，對菌株攜帶多重耐藥基因統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)其中6株攜帶五種類型的耐藥基因，1株攜帶四種類型耐藥基因，4株攜帶三種類型耐藥基因，就單個耐藥基因來說，t

5、etA(100％)、tetB(100％)、GyrA(100％)檢出率最高，blaTEM(90.90)、parC(90.90)次之，aacC2(63.64)也在50％以上，其余耐藥基因檢出率都較低。之后又采用微量稀釋法和棋盤法測定了CTX和ENR單用的MIC值和聯(lián)合MIC值。結(jié)果顯示聯(lián)用CTX和ENR時比單用CTX和ENR時某些菌株的MIC有所下降，MIC50都有所下降，但是MIC90沒有下降。后又采用瓊脂二倍稀釋法測定頭孢噻肟聯(lián)合恩諾沙

6、星對11株攜帶F17毒力基因大腸桿菌的單用及聯(lián)用的耐藥突變度(MPC)，計算耐藥指數(shù)(SI)。結(jié)果顯示:當CTX和ENR聯(lián)合后，CTX的MPC90降到了256mg/L，SI下降了4倍，MPC90/MIC90為1，即聯(lián)合ENR后能使CTX的MSW完全關(guān)閉;同樣ENR的MPC90降到了256mg/L，SI下降了2倍，MPC90/MIC90為2，MSW變窄，即聯(lián)合CTX后能使ENR的MSW減小。研究表明了，頭孢噻肟聯(lián)合恩諾沙星能夠縮小甚至關(guān)閉